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目的:比较重组25KDa全长人釉原蛋白(rhAm)和提取的猪釉基质蛋白(EMPs)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)和人包皮成纤维细胞(HFF)生物学特性的影响,初步探讨rhAm促进牙周组织再生的作用和可能机制,探索rhAm临床应用的可行性。 意义:采用两种蛋白作为刺激因素,观察成纤维细胞在不同条件下的生物学特性变化,了解rhAm和EMPs对目标细胞影响的差异,以期对细胞工程学和口腔药理学的基础研究提供理论数据。同时对rhAm促进牙周组织再生的机制做初步探讨,为rhAm应用于临床牙周组织再生治疗的可行性提供实验数据。 方法:选择BL21/pET28a-His-SUMO-rhAm表达系统,在适宜的条件下经诱导表达和酶切纯化得到25KDa全长rhAm,并采用SDS-PAGE和Western blot鉴定;乙酸法提纯EMPs。体外培养HPDLF和HFF。用不同浓度的rhAm和EMPs分别刺激HPDLF、HFF,观察并比较两种蛋白对细胞粘附、增殖和迁移能力的影响。 结果: 1、利用His-SUMO融合表达系统,经诱导表达和酶切纯化得到重组25KDa全长人釉原蛋白(rhAm)。通过乙酸法得到猪釉基质蛋白(EMPs)。 2、原代培养获得性状稳定的第3-6代人牙周膜成纤维细胞,经鉴定证实为外胚间充质来源的成纤维细胞;培养得到性状稳定的人包皮成纤维细胞株。 3、rhAm和EMPs均能明显促进人牙周膜成纤维细胞的黏附、增殖和迁移(p<0.01),两种蛋白之间作用无明显差异(p>0.05)。 4、rhAm和EMPs均能明显促进人包皮成纤维细胞株的黏附、增殖和迁移(p<0.01),两种蛋白之间作用无明显差异(p>0.05)。 结论:25KDa rhAm和EMPs对成纤维细胞具有相似的生物学作用。rhAm和EMPs可通过增强相关成纤维细胞的生物学活性,从而促进牙周及相关组织的再生和愈合。