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小鹅瘟是由小鹅瘟病毒引起的主要侵害4-20日龄雏鹅和雏番鸭的一种急性或亚急性、高度接触性和败血性传染病,给养鹅业造成了严重危害。该病可从临床症状及流行病学特点作出初步诊断,但确诊需借助病原学检查、血清学方法和分子生物学技术。病原学检查和血清学方法均存在不够敏感、检测所需时间长等不足,不能满足临床快速诊断小鹅瘟的需要。而PCR技术具有敏感性高、特异性强等优点,能够较好满足临床快速准确诊断疾病的需要。本试验根据GenBank发表的小鹅瘟病毒B株全基因序列,针对VP3基因保守区,设计了一对扩增主要结构蛋白VP3基因的特异性引物,对小鹅瘟病毒延边分离株基因组DNA进行了PCR扩增,得到了与预期大小一致的VP3完整基因片段,将其回收纯化后与pGEM-T Easy载体连接;然后转化至大肠杆菌感受态细胞JM109中进行克隆,经酶切分析、PCR鉴定及序列分析,验证了所克隆的基因是小鹅瘟病毒VP3基因。同时,建立了小鹅瘟病毒单管巢式PCR诊断方法,扩增出了与预期片段大小相符的长度为406bp的基因片段。特异性试验表明,只有小鹅瘟病毒模板能扩增出特异性条带。敏感性试验表明,当病料中小鹅瘟病毒核酸含量为0.02175fg/μL时,仍可以检测到,出现清晰的特异性片段,比小鹅瘟病毒常规PCR诊断方法敏感性高100倍。应用小鹅瘟病毒单管巢式PCR诊断方法和小鹅瘟病毒常规PCR诊断方法分别对延边地区疑似小鹅瘟病死雏鹅80只进行了检测,有典型病理变化的20只病死雏鹅,阳性检出率均为100%(20/20),无典型病理变化的60只病死雏鹅,小鹅瘟病毒单管巢式PCR诊断方法阳性检出率为93.3%(56/60),而小鹅瘟病毒常规PCR诊断方法阳性检出率为80%(48/60)。由此可见,所建立的小鹅瘟病毒单管巢式PCR诊断方法较常规PCR诊断方法特异性和敏感性更强,可避免常规PCR诊断方法检测时造成的假阴性结果,为临床更快速准确诊断小鹅瘟提供一种有效的诊断手段。