糖基因在白血病耐药性中的特征性改变及其诊断价值

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目的:通过研究糖基因在人白血病K562及其耐阿霉素细胞株K562/ADR中的差异表达,明确这些糖基因与白血病耐药的相关性,从而为预测和诊断白血病耐药性,寻求逆转药物提供新策略和靶点。方法:(1)采用real-time PCR技术筛选人白血病细胞及其耐药细胞株中差异表达的糖基因,筛选出两组细胞差异表达3倍以上的糖基因,初步探索糖基因在白血病耐药性中的特征性改变。(2)采用流式细胞仪分析白血病耐药细胞株与多种FITC标记植物凝集素的结合能力,表征比较细胞膜表面糖链的特征;质谱分析细胞表面糖链的组成差异。(3)通过RNA干扰技术干预差异表达的糖基因,MTT法检测干扰前后白血病耐药细胞株的生长情况及对化疗药物的敏感性,观测糖基因的表达调控对白血病耐药的影响。(4)进一步修饰白血病耐药细胞株的N-糖基化(衣霉素Tunicamycin和PNGaseF处理),Western Blot检测P-gp、CD147糖蛋白的表达水平;MTT法检测N-糖基化修饰前后白血病耐药细胞株的生长情况及对化疗药物的敏感性,观察上述细胞膜型N-糖基化修饰后对化疗药物耐药性的影响。结果:(1)12个糖基因在K562和K562/ADR细胞株中表达具有显著的差异;高表达的糖基因与FITC标记植物凝集素的结合能力增强;K562和K562/ADR细胞膜表面N-糖链的组成具有显著差异。(2)当通过RNA干扰技术特异性使K562/ADR细胞中B3GNT8和ST8SIA4表达下调时,该细胞的药物敏感性增强(P﹤0.05)。(3) K562/ADR细胞经N-糖基化修饰后,P-gp、CD147糖蛋白的表达水平发生改变,同时该细胞的药物敏感性也增强(P﹤0.05)。结论:(1)人白血病细胞及其耐药细胞株中糖基因、细胞膜表面糖链特征、N-糖链的组成均有显著差异,这些特征性改变与白血病多药耐药具有相关性。(2)人白血病细胞株中糖基因的改变、N-糖基化修饰均与白血病多药耐药具有相关性,为预测和诊断白血病耐药性,寻求逆转药物提供新策略和靶点。
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