论文部分内容阅读
石耳(Umbilicaria),是一种食药兼用的真菌和藻类的共生体。其药用价值很高,而其多糖作为一种活性物质,具有很强的抗癌,抗血栓活性,能增强机体的免疫能力。目前国内外对石耳多糖(UPS)的研究报道较少,对其分离纯化及结构方面的研究更是不够全面。本文主要研究了石耳多糖的最佳提取条件,经分离纯化得到石耳多糖纯品,并对其结构进行表征和体外抗氧化活性进行初探。首先对石耳多糖的提取工艺进行了研究。选取提取温度50～90℃、提取时间1～5 h、提取水料比5:1～25:1 ml/mg和提取次数1～5次分别进行单因素实验,最后选择前三种因素利用Design-Expert软件进行响应曲面分析,结合实际操作,得到石耳多糖的最佳理论提取工艺为:提取温度为84.83℃,提取时间为3.56 h,提取水料比为20.64:1 mL/g,石耳多糖提取得率为13.37%。然后将提取出的石耳粗多糖进行分离纯化后测定其基本理化性质。利用DEAE-纤维素-52离子交换柱对石耳粗多糖进行初步分离纯化,得到两个组分UPS-1和UPS-2,得率分别为49.05%和23.23%。再利用葡聚糖凝胶G-150对UPS-1和UPS-2进一步纯化,得到两个组分UPS-1-1和UPS-2-1,得率分别为42.17%和42.6%。对石耳粗多糖UPS及分离纯化后的UPS-1-1和UPS-2-1进行基本理化性质分析,总糖含量分别为43.68%,55.12%和53.34%;蛋白质含量分别为1.01%,0.31%和0.28%;硫酸基含量分别为2.38%,4.07%和5.02%;糖醛酸含量分别为6.50%,19.29%和19.50%。对石耳多糖的两个纯化组分做结构鉴定。利用高效体积排阻色谱法(HPSEC)检测其相对分子量和纯度,结果表明,UPS-1-1和UPS-2-1两个组分都是单一组分,分子量分别是124.7 kD和249.4 kD。对石耳多糖的两个纯化组分进行衍生化后利用高效液相色谱法(HPLC)分析其单糖组成。UPS-1-1的单糖组成及摩尔百分比为甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:半乳糖=0.59:3.12:93.09:3.03;UPS-2-1的单糖组成及摩尔百分比为甘露糖:葡萄糖=20.66:79.34。利用溴化钾压片法对石耳多糖的两个纯化组分进行红外光谱分析。结果发现,这两个组分在4000 cm-1～400 cm-1范围内呈现典型的多糖吸收峰,说明检测样品都是多糖类物质,其中含有硫酸和羧酸基团。运用扫描电镜观察石耳多糖两个纯化组分的表面形貌,结果发现,UPS-1-1和UPS-2-1在高倍镜下表面平整较为光滑,说明分子间作用力强。利用原子力显微镜观察多糖纯化组分的形态,结果显示,这两个组分均为多个糖链的聚集体,而非单个糖链。对石耳粗多糖和两个纯化组分的抗氧化活性进行初步研究。运用化学方法分别测量分析了石耳粗多糖(UPS),两个纯化组分(UPS-1-1和UPS-2-1)的体外抗氧化活性。结果表明:三者还原力较弱,但它们体外能够清除羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O2-·),具有一定的抗氧化活性。UPS-2-1比粗多糖UPS和UPS-1-1具有更高的体外抗氧化活性。