鲑鳟鱼皮、骨低聚活性胶原多肽的制备研究

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本研究主要以陆生冷泉水鲑鳟鱼(trout)养殖加工业的下脚料(鲑鳟鱼皮、鱼骨)为对象,利用生物化学技术和酶工程技术,通过脱色、脱钙、正交优化、过程控制、分离纯化等过程,以分子量(Mr)<3000Da、具有生物活性、易于人体吸收和工艺放大为目标,研究开发鲑鳟鱼鱼皮、鱼骨低聚活性胶原肽的制备方法。以鲑鳟鱼皮为原料,用木瓜蛋白酶(Pap.)和风味蛋白酶(Fla.)提取胶原肽。两酶分别做单因素、正交试验及两酶的三种组合试验。同时,进行了脱色与工艺改进研究。结果表明:Pap.最优结果为s/11:22,酶量0.6%,T 60℃,pH 6.4,t3h;胶原回收率14.33%,DH 10.33%;Fla.最优结果为s/11:20,酶量0.35%,T55℃,pH6.5,t2.5h;胶原回收率C%为13.68%,DH10.65%;先Pap.后Fla.的组合方式最优;活性炭可以用来脱色;粗滤、微滤、超滤、浓缩、干燥过筛等分离纯化得到粉剂,粉剂纯度91.04%;Mr小于2000Da的分子量占82.23%;3mg/ml粉剂样品FARP值3.39mmol/L,羟自由基清除率10.09%,超氧自由基清除率3.95%。从9种备选酶中选取了胃蛋白酶(PPS)和Fla.,以脱钙的鲑鳟鱼骨制取Mr<3000Da的活性胶原肽,并做抗性测定。结果为:EDTA微波复合脱钙最好,浓度、t、微波功率等对脱钙效率和胶原损失影响较大;最优酶解工艺为先Pep.1.2%,s/11:30,T65℃,pH2.2,t6h;胶原回收率C%为8.68%,DH2.23%,后调s/l至1:35,Fla.1.2%,T57℃,pH 6.4,t4h,胶原回收率C%为6.96%,DH5.81%;分离纯化得到成品,纯度84.08%,羟脯氨酸(Hpro) 6.22%;粉剂FRAP值为3.80mmol/L,·OH清除率为11.24%。除了确定最优酶种、水解参数、酶复合方式、分离纯化和胶原肽理化特性外,对工艺过程还做了部分预处理,反应模式的改进等研究,获得了易于放大应用的制备方法。
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