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目的：探讨长肌球蛋白轻链激酶(L-MLCK)氨基末端的2个免疫球蛋白样结构(2Ig)和5DFRXXL序列与微丝的结合和促使丝状肌动蛋白(F-actin)聚集成束的特性。
方法：构建分别带有L-MLCK氨基末端不同片段的EGFP融合质粒，并将这些质粒转染到NIH3T3细胞内，在荧光显微镜下观察EGFP的分布特点，以确定L-MLCK氨基末端与微丝的结合位点；构建分别带有L-MLCK氨基末端2Ig结构和5DFRXXL序列的质粒，然后将其转化到细菌中，诱导表达了HA标记的重组2Ig和5DFRXXL蛋白；通过结合动力学实验分析重组2Ig及5DFRXXL蛋白与肌丝或F-actin的结合能力；应用交联实验来证明重组2Ig、5DFRXXL蛋白促使F-actin聚集成束的特性；再用激光共聚焦及电子显微镜观察F-actin聚集成束的形态学特点。
结果：通过观察转染了EGFP融合质粒的细胞，发现在L-MLCK的N端6个Ig样结构中，只有2Ig和6Ig结构(包含了2Ig)能够与微丝结合，由此确定了L-MLCK的N端与微丝的结合位点为2Ig蛋白；结合动力学实验的结果显示：2Ig与F-actin的解离常数KD为0.40±0.1μM，5DFRXXL蛋白与F-actin的KD为0.41±0.1μM，二者均与F-actin有较高的亲和力，并且2Ig与肌丝和F-actin的KD值相似，说明2Ig是直接与F-actin结合的；交联实验证明2Ig和5DFRXXL蛋白都能有效地交联F-actin，使其聚集成束；激光共聚焦及电子显微镜观察的结果显示：F-actin纤维在重组2Ig或5DFRXXL蛋白的作用下能够形成典型的F-actin蛋白束。
结论：1)L-MLCK氨基末端与微丝结合的位点是2Ig区域；2)2Ig和5DFRXXL区域均直接与F-actin结合，且有较强的结合能力；3)2Ig和5DFRXXL区域能够促使F-actin聚集成束；4)L-MLCK除了能够通过其磷酸激酶活性控制细胞收缩外，还可能作为一个新的F-actin集束蛋白作用于细胞骨架，是一个收缩-骨架形成的耦连分子。