营养素及非甾体药物对白血病细胞死亡模式的影响及机制研究

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目的:1.检测营养素及非甾体药物对白血病细胞坏死、衰老、自噬、凋亡的影响;2.检测营养素及非甾体药物对白血病细胞中p27和c-myc mRNA水平表达的影响;3.检测营养素及非甾体药物对白血病细胞端粒酶活性的影响。方法:1.用DMSO将维生素C(Vit-C)、白藜芦醇(Res)、环氧化酶-2抑制剂(NS-398)、吲哚美辛(IND)稀释成终浓度分别为300μM、10μM、30μM、30μM,作用于急性髓性白血病细胞系U-937、急性淋巴性白血病细胞系Daudi4天后,分别进行台盼蓝染色法检测药物对细胞系U-937和Daudi坏死的影响;β-半乳糖苷酶染色法检测药物对细胞系U-937和Daudi衰老的影响;MDC染色法检测药物对细胞系U-937和Daudi发生自噬现象的影响;AV-PI双染法检测药物对细胞系U-937和Daudi凋亡的影响。2.采用半定量RT-PCR检测药物作用后,U-937和Daudi细胞中p27和c-myc mRNA水平的表达情况;3.采用Real-time PCR检测药物作用后,U-937和Daudi细胞端粒酶催化亚基(TERT)活性的改变。结果:1.台盼蓝染色结果表明,与对照组相比,药物Vit-C、Res、NS-398、IND可促进急性髓性白血病细胞U-937坏死,各药物组差异皆有统计学意义(P<0.05),但对急性淋巴性白血病细胞Daudi影响不大(P>0.05),说明四种药物可促进急性髓性白血病细胞U-937坏死。β-半乳糖苷酶染色结果表明,与对照组相比,药物Vit-C、Res、NS-398、IND可促进U-937衰老,各药物组差异皆有统计学意义(P<0.05),其中Res组差异最为明显(P<0.01),但对Daudi影响不大(P>0.05),说明四种药物可不同程度地促进急性髓性白血病U-937细胞衰老。MDC染色结果表明,与对照组相比,药物Vit-C、Res、NS-398、IND可促使U-937发生自噬,差异有统计学意义(P<0.01),但Daudi影响不大(P>0.05),说明四种药物均可诱导急性髓性白血病U-937细胞发生自噬。AV-PI双染结果表明,与对照组相比,药物Vit-C、Res、NS-398、IND可促使U-937凋亡,各药物组差异均有统计学意义(P<0.01),但对Daudi影响不大(P>0.05),提示四种药物皆可促进急性髓性白血病细胞U-937发生凋亡。2. RT-PCR结果表明,药物Vit-C、Res、NS-398、IND可上调急性髓性白血病细胞U-937细胞p27基因表达水平,同时降低c-myc基因表达水平,进一步从分子水平说明该四种药物可抑制急性髓性白血病细胞的增殖,促进其凋亡。3. Real-time PCR结果表明,药物Vit-C、Res、NS-398、IND可降低急性髓性白血病细胞U-937细胞TERT活性,差异有统计学意义(P<0.05),其中非甾体药物NS-398和IND对其影响较大(P<0.01),进一步说明该四种药物可抑制急性髓性白血病细胞U-937的增殖,促进其衰老,从而抑制肿瘤的发展。结论:1.药物Vit-C、Res、NS-398、IND可促进急性髓性白血病细胞坏死、衰老、自噬、凋亡;2.药物Vit-C、Res、NS-398、IND促进急性髓性白血病细胞死亡模式的机制可能与p27基因高表达、c-myc基因表达下降以及端粒酶活性降低有关。
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