谷氨酸（Glutamate,Glu）是中枢神经系统内含量最高、作用最广泛的兴奋性氨基酸。当大脑出现缺血缺氧损伤时,细胞外Glu浓度会过高,并会和Glu受体过度结合,导致神经元死亡。苦茶碱（Theacrine,TC）是主要存在于苦茶中的嘌呤生物碱,具有镇静催眠、抗抑郁和消炎镇痛等生理功效。本文研究了运用制备色谱法分离制备苦茶中的TC的方法,以HT22细胞为研究对象,建立了Glu诱导损伤的细胞模型,探讨了TC对Glu诱导HT22细胞损伤的保护作用以及可能机制。具体研究结果如下:（1）以制备TC的纯度、回收率、保留时间和分离度为考察指标,研究了不同的流动相比例、上样浓度、上样体积以及流动相流速对分离制备过程的影响。TC的最佳制备色谱程序为:B相35%平衡1BV（一个柱体积）,手动进样,1.01-1.50BV B相35%,1.51-3.30BV B相45%,上样浓度为10mg/ml,上样体积为500μl,流速为2ml/min。分离得到的物质经过UPLC-MS/MS鉴定,确定为TC。（2）以HT22细胞为研究对象,5mmol/L的Glu建立细胞损伤模型,发现TC和A_2A受体拮抗剂SCH58261对Glu诱导的HT22细胞损伤具有保护作用,能够明显改善细胞形态,提高细胞存活率,并且具有一定的浓度依赖性。（3）Glu诱导HT22细胞能够使SOD活力下降,MDA含量上升,TC能够显著性提高Glu诱导HT22细胞的SOD活力,显著性降低MDA含量,并表现出一定的浓度依赖性。（4）通过观察Hoechst 33342染色后HT22细胞的形态以及流式Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,发现Glu诱导可以使HT22细胞产生明显的凋亡形态,细胞凋亡率明显增加,而加入TC后可以明显改善Glu诱导的HT22细胞的凋亡形态、降低细胞凋亡率,并表现出一定的浓度依赖性。综上所述,制备色谱能够有效分离制备苦茶中的TC,并且TC能够抑制Glu诱导的HT22细胞损伤,其作用机制为:TC的保护作用可能与抗氧化和抗凋亡有关,也可能与TC作为A_2A受体拮抗剂有关。