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目的:有文献证实世界范围内来看,胃癌在恶性肿瘤中发病率位列第五,致死性则位列第三。在我国则略有不同,其发病率在男性患者中仅次于肺癌,排在第二位,在女性患者中仅次于乳腺癌和肺癌,排在第三位,综合来看其致死性排在第二位。胃癌是由多种因素包括感染、年龄、性别、饮食、地域、生活方式等共同作用,多基因相互调控,多步骤共同参与的缓慢过程,目前为止其发生发展的分子机制尚未完全探明,其调控机制的异常复杂进一步增加了治疗的不确定性。因此需要积极探索其发病机制,为下一步的诊疗提供具体的方向。轴突导向因子4D(Sema4D)是蛋白质信号家族Semaphorin家族的一员,也被称为CD100,是一种细胞表面可溶性蛋白,作为一种跨膜蛋白,轴突导向因子4D以同源二聚体的形式表达于细胞表面,在胰腺癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、结肠癌等多种恶性肿瘤中均有高表达,其表达程度与肿瘤的组织学分级、TNM分期以及放化疗的抵抗力成正相关,在肿瘤的发生发展,浸润生长、远处转移中起重要作用,且降低其表达能明显抑制上述恶性肿瘤的生物学行为。肿瘤的发生和发展与肿瘤细胞所处的内外环境密切相关,肿瘤细胞赖以生存的环境即为肿瘤微环境(tumor micro environment,TME)。TME由肿瘤细胞、细胞因子、趋化因子和多种基质细胞等组成,其中参与肿瘤发生和发展过程最多的细胞是巨噬细胞,是肿瘤微环境(TME)中免疫细胞浸润的主要成分之一,甚至可达瘤体体积的50%,而这种浸润在肿瘤细胞周围的巨噬细胞即被命名为肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)。肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)主要来源于骨髓释放的外周血液循环中的单核细胞和/或大脑中的小胶质细胞,通过多种细胞因子、趋化因子的作用,募集到肿瘤组织中。经特定的条件诱导后,巨噬细胞可极化为M2型(替代活化巨噬细胞),TAMs即是M2型(替代活化巨噬细胞)的一种。通过促进肿瘤血管生成、淋巴管生成、细胞外基质的降解和重塑等促进肿瘤的侵袭和迁移。有研究显示TAMs能够影响Sema4D的表达,进而影响结直肠癌、肝癌、前列腺癌等的生物学行为,但尚未有研究证实TAMs和Sema4D在胃癌发生、发展中的的相互作用关系以及具体机制,因此探索他们的结构、功能以及作用机制,能够为胃癌的治疗提供具体的理论基础。本研究以TAMs和Sema4D在肿瘤中的作用进行总结,以期能够为临床上的诊疗工作提供充分的理论依据。方法:采用免疫组织化学SP(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶)法检测290例胃癌组织和290例相应癌旁组织中CD68和Sema4D的表达,并经Spearman等级相关分析,明确CD68和Sema4D在胃癌组织中表达的相关性,从而进一步分析二者与临床病理特征的关系;对THP-1单核细胞进行诱导,使其极化为M2型巨噬细胞(TAMs)。细胞免疫荧光实验鉴定M2型巨噬细胞(TAMs)。随后构建胃癌SGC-7901细胞与肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)非接触式共培养(transwell共培养)体系,空白对照组为一般正常条件培养的SGC-7901细胞,SGC-7901细胞与M2型巨噬细胞(TAMs)共培养组为实验组,通过侵袭实验、迁移实验评估TAMs对胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移能力的影响;采用酶联免疫吸附实验(Elisa)检测不同培养体系下胃癌SGC-7901细胞上清中分泌型Sema4D的不同。将所有数据汇总,统一用SPSS 18.0软件处理。结果:1.胃癌组织中CD68和Sema4D蛋白的阳性表达率显著高于癌旁组织分别为:[71.7%(208/290)vs 33.8%(98/290),c2=83.703;74.5%(216/290)vs 42.8%(124/290),c2=60.161;均P<0.01];CD68蛋白主要集中分布在胃癌间质组织细胞,Sema4D蛋白在主要集中分布在胃癌细胞的细胞核和细胞质中以及肿瘤间质细胞(主要是TAMs)细胞质中;Sema4D和CD68蛋白的阳性表达率与年龄、性别、肿瘤直径大小无关(P>0.05),而与胃癌的组织分化类型、有无淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05);胃癌组织中Sema4D和CD68蛋白表达呈正相关(r=0.467,P<0.01)。2.悬浮细胞经THP-1经PMA,IL4,IL13诱导处理后,能极化为TAMs。在Transwell Assay共培养体系中,TAMs能明显增强胃癌SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力。3.Elisa酶联免疫吸附实验证实共培养体系能促进胃癌SGC-7901细胞分泌更多Sema4D蛋白。结论:1.TAMS可能通过上调分泌型Sema4D蛋白的表达来促进胃癌细胞的侵袭和转移。2.在胃癌组织中联合检测TAMs标记物CD68和Sema4D有可能预测胃癌的发展趋势。3.TAMs和Sema4d在许多肿瘤中高度表达,与肿瘤的发展、进展、血管生成、侵袭和转移有关。4.CD68和Sema4D蛋白的联合检测显示了预测胃癌进展趋势和确定患者预后的潜力。对其机制的不断深入研究必将为肿瘤的防治注入新的活力。