多杀菌素(Spinosad)是由刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)经有氧发酵产生的胞内次级代谢产物,其兼有生物农药的安全性和化学合成农药的速效性的优点。本文在高效液相色谱检测方法的基础上,建立了多杀菌素固体菌粉油相、非油相分步提取纯化工艺,研究内容包括:油相多杀菌素反萃取,水相结晶工艺;非油相多杀菌素大孔树脂、阴离子交换树脂串联纯化工艺,并进行中试放大实验研究。主要研究结果如下:首先建立了多杀菌素的高效液相色谱检测方法,该法能准确地测定多杀菌素的浓度。通过对固体菌粉进行除油工艺进行探索,确定了较好的除去固体菌粉中油脂的工艺路线,结果表明,除油试剂用石油醚,用量为固液比1:3(g/ml),采用快速抽滤的方法,除油率达到固体菌粉的7.5%,其中多杀菌素的含量412.3mg/ml。运用反萃取,水相结晶的技术将油相中的多杀菌素分离,最佳工艺确定为以p H=2柠檬酸水溶液反萃取,萃取三次,萃取体积为1:1(V/V),每次萃取时间15min,合并水相;以饱和的Na HCO3溶液为p H调节溶剂进行水相结晶,调节p H=9-10直到没有晶体析出,抽滤,结晶,多杀菌素得率占菌粉重量的0.81%,纯度63.1%。通过正交实验优化了除油后固体菌粉超声提取工艺,结果表明,以甲醇作为提取试剂,超声频率为75赫兹,固液比1:15,提取两次,每次80min时提取效率最高提取率达到88.47%该实验中三个因素对多杀菌素提取率的影响程度依次为固液比>提取次数>提取时间。考察了大孔树脂纯化多杀菌素工艺,提取的多杀菌素浸膏经大孔吸附树脂吸附后,选用丙酮/水洗脱,结果表明,在70%~95%丙酮/水洗脱范围内,多杀菌素被大量地洗脱,回收率可达80.72%。研究了阴离子交换树脂对经过纯化后的多杀素溶液的脱色效果,实验结果表明,优化后的脱色工艺条件为:脱色时间3h,树脂添加量为4%(g/V),摇床转速150r/min,脱色p H 10,在以上操作条件下,717型树脂对多杀菌素提取液的脱色率可达到80%以上,而多杀菌素损失率仅为2%左右。脱色后的产品在色泽上有明显改观,基本能达到生产要求。分别进行了150kg固体菌粉,400kg固体菌粉进行放大工艺验证,进过油相分离工艺,油相多杀菌素反萃取,水相结晶工艺;非油相多杀菌素大孔树脂、阴离子交换树脂串联纯化工艺,150kg固体菌粉的得到1.8kg多杀菌素粗品,纯度67%;400kg菌粉得到2.4kg多杀菌素粗品,纯度56%。