1、研究目的 细菌内毒素(endotoxin)性致病是一个发病环节十分复杂的病理过程,致病作用非常广泛,尤其近几年发现很多心脑血管疾病伴随着内毒素致炎作用,不论是急性疾病或慢性疾病内毒素引起的病理性损害越来越引起人们的高度重视,尤其在内毒素致病过程中与免疫细胞(如单核巨噬细胞)以及炎性细胞因子有关(如TNF-α、IL-1、IL-6等),因此从免疫学角度探讨内毒素致病的机制以及防治作用将有着中药意义。 根据现代医学研究的成果,西药拮抗内毒素治疗在临床上没有产生显著的治疗效果,而中药防治内毒素性休克的研究上初步显出优势,尤其利用中药具有调节机体炎症反应、保护细胞、器官功能方面有着突出特点的情况下进行研究更有重要的价值。而目前能显著降低内毒素性休克患者死亡率的、疗效稳定的中药制剂在临床应用上初步崭露头角,但仍需要进一步的开发,根据文献报道清热解毒类及活血化瘀类等中药有效成分,在抗炎方面具有一定效果,但在抗心血管疾病过程中是否具有保护内毒素的损伤作用是一个值得关注的问题。因此设想中药抗内毒素作用过程是否可以通过改善或逆转内毒素对单核/巨噬细胞内某些蛋白表达的变化,而从细胞整体水平上调整细胞内过度表达或降低的蛋白质,这也是本研究的主要目的,目前尚未见到有关报道。所以从抗内毒素角度筛选抗内毒素效果明显的中药有效成分,并在蛋白质水平上探讨其作用机制是本课题的主要着眼点。 本课题首先利用革兰阴性细菌内毒素的主要成分脂多糖(lipopolysaccharide LPS)诱导人单核/巨噬细胞株THP-1细胞,建立内毒素诱导的细胞模型,该细胞模型平台的建立及其应用,将为筛选抗内毒素效果显著的中药有效成分奠定基础。在此基础上进一步对多种抗内毒素的中药有效成分进行筛选,利用蛋白质组学技术,在细胞水平上寻找中药作用的靶点,将可能对中药研究和内毒素性损伤的防治提供新的思路。 2、根据上述研究目的,本论文研究的主要内容、方法和结果如下: 2.1 对THP-1细胞特性的研究 ①THP-1细胞由单核细胞成熟为巨噬细胞特性(佛波酯—PMA诱导)。②细胞生长曲线、对各种细胞刺激剂的敏感性(如:脂多糖—LPS、植物凝集素—PHA、刀豆蛋白