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氨萘菲特是一种曾进入Ⅱ期临床的3-硝基萘酰亚胺类衍生物,因其毒副作用较大而未能进入后期临床研究,而氨萘非特芳香环上5-位氨基是引起其毒性的主要原因。7b是一种以氨萘非特为母体,通过去掉其5位氨基而形成新型萘酰亚胺化合物。已有文献报道7b能够通过p21介导的G1期阻滞和ROS介导的细胞凋亡来抑制肿瘤细胞增殖,具有良好的抗肿瘤活性；同时,7b在低浓度下具有抑制T细胞活化和炎症细胞因子分泌的作用,表现出潜在的抗炎活性,但其抗炎的药理学作用及分子机理尚不明了。为此,本课题采用LPS诱导的RAW264.7细胞作为炎症细胞模型,探索了7b的抗炎活性及其抗炎作用分子机理。课题通过ELISA和Nitrite assay,发现7b能够浓度依赖性的抑制细胞上清中PGE2和NO的产生。通过Western blot和RT-PCR实验,观察到7b能够浓度依赖性的抑制COX-2和iNOS的蛋白和mRNA表达,而不影响COX-1表达。ELISA和RT-PCR实验也显示7b抑制促炎症细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的产生,而增加抗炎症细胞因子IL-10的分泌。这些研究结果表明7b具有抑制炎症介质和促炎症细胞因子产生的作用,而且这种抑制作用发生在转录水平。Luciferase Reporter assay结果显示7b抑制COX-2和iNOS启动子活性,而不影响COX-1启动子,进一步证明抑制作用发生在转录水平。NF-κB转录因子在调控COX-2、iNOS基因转录中具有重要作用。Luciferase Reporter assay发现,7b能够浓度依赖性的抑制NF-κB启动子活性,说明7b能够抑制NF-κB活化。NF-κB活化需要IκBα磷酸化和降解。为此,本研究进一步通过Immunofluorescence和Western blot实验观察IκBα磷酸化、降解以及NF-κB/p65核转位的变化。研究发现7b抑制了IκBα磷酸化和降解,以及随后的NF-κB/p65核转位。这些表明7b通过抑制IκBα磷酸化和降解,减少了NF-κB/p65核转位作用,由此下调了COX-2、iNOS靶基因的表达。LPS刺激会引起MAPKs信号通路蛋白磷酸化。因此,本研究检测了7b对MAPKs通路蛋白磷酸化的影响。Western blot结果显示7b能够抑制p38和ERK磷酸化,而不影响JNK。综上所述,7b主要是通过NF-κB信号通路和MAPK信号通路来抑制COX-2、iNOS等炎症因子的表达,表现出了抗炎性质。