绝经后女性宫颈高度上皮内病变LEEP术后HPV持续感染与VMB的相关性研究

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目的:本研究利用16SrRNA高通量测序技术分析高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的绝经后女性宫颈高度上皮内病变(HSIL)环形电切术(LEEP)后HPV持续阳性与HPV转阴患者之间的阴道微生物菌群(VMB)的组成及多样性的变化。探讨绝经后女性宫颈高度上皮内病变LEEP术后HPV的持续感染与VMB之间的关系,旨在从阴道菌群方面着手对绝经后女性宫颈高度上皮内病变LEEP术后进行管理,为加速绝经后女性LEEP术后HPV转阴及有效防止病变复发提供有效理论依据。方法:1.研究对象入组及阴道分泌物采集:严格按照纳入排除标准将15例病理诊断为HSIL且LEEP术后HPV持续阳性的绝经后女性纳入HPV持续阳性组(Case组),按照纳入排除标准将15例病理诊断为HSIL且LEEP术后HPV转阴的绝经后女性纳入HPV转阴组(B组),用阴道拭子采集研究对象的后穹窿分泌物,随后将所采集的阴道分泌物密闭封装并置于-80℃冰柜中保存。2.研究对象的临床资料收集:术前及术后第3、6、12个月的HPV结果(相邻2次随访中,患者HPV检查均显示阳性,且与术前为相同类型感染视为HPV持续感染,HPV检查均为阴性者视为术后HPV转阴。)3.阴道微生物样本DNA高通量测序:提取出阴道菌群的基因组DNA,扩增16Sr DNA V3和V4高变区,借助Illumina平台测序,根据物种鉴定结果,按“门、纲、目、科、属、种”分类方法对阴道菌群进行分类,进一步完成Alpha多样性、Beta多样性、菌群组成及LEf Se等生物信息学分析。结果:1.韦恩分析发现,Case组OTU数多于HPV转阴组,说明Case组物种较B组丰富。2.Case组Chao1、Shannon、Simpson、PD whole tree指数均显著大于B组,说明LEEP术后HPV持续感染组阴道菌群物种多样性和丰富度较高。3.Beta分析显示Case组与B组阴道菌群存在差异。4.门水平,B组厚壁菌门占比最高,Case组拟杆菌门占比最高。5.属水平,Case组拟杆菌属占比较高,B组以乳酸杆菌属占比较高。6.种水平,B组菌群以惰性乳酸杆菌为主,菌群结构属于CST III型,Case组出现了占比较高的厌氧菌(加德纳菌、普雷沃氏菌、阴道阿托波菌),乳酸杆菌占比下降,此组菌群结构接近CST IV型。结论:1.绝经后女性宫颈高度上皮内病变LEEP术后HPV持续感染组VMB结构相对复杂,物种多样性增加。HPV转阴组女性VMB结构简单,物种多样性较HPV持续感染组低。提示HISL患者VMB多样性增加与LEEP术后HR-HPV持续感染有关。2.绝经后女性宫颈高度上皮内病变LEEP术后HPV转阴组惰性乳酸杆菌为优势菌群,提示惰性乳酸菌能够加速LEEP术后HPV的清除。3.绝经后女性宫颈高度上皮内病变LEEP术后HPV持续感染组乳酸杆菌占比降低,厌氧菌如加德纳菌、普雷沃氏菌、阿托波菌等占比升高,提示加德纳菌、普雷沃氏菌、阿托波菌与LEEP术后HPV持续感染有关。
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