【摘 要】
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噬菌体展示技术作为一种重要的技术手段,被广泛应用于生物及相关领域。如疾病诊断及治疗、分子成像、免疫分析、纳米材料等。本研究通过改造M13噬菌体使其在外壳蛋白gp8上展
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噬菌体展示技术作为一种重要的技术手段,被广泛应用于生物及相关领域。如疾病诊断及治疗、分子成像、免疫分析、纳米材料等。本研究通过改造M13噬菌体使其在外壳蛋白gp8上展示酪氨酸残基,研究发现铁离子浓度与噬菌体滴度存在联系,在一定范围内铁/亚铁离子浓度与噬菌体滴度的降低率成正比。该酪氨酸展示的M13噬菌体作为生物传感器检测铁及亚铁离子。在对Fe~3+的检测中,铁离子浓度在200 nmol/L到8μmol/L与空斑降低率线性相关,检测限达58nmol/L。在对Fe~2+的检测中,亚铁离子浓度在800 nmol/L到8μmol/L与空斑降低率线性相关,检测限达到641.7 nmol/L。同时还使用Ni~2+,Pb~2+,Zn~2+,Mn~2+,Co~2+,Ca2~+,Cu~2+,Cr~3+,Ba~2+,K~+等作为干扰离子,发现这种生物传感器对铁及亚铁离子检测专一性较好。这种生物传感器检测铁及亚铁离子的技术有着较好的检测专一性和灵敏度,并无需其他仪器设备的辅助,在工厂、生化实验室等特殊环境下的铁离子快速检测有着独特的优势。HIV-1表面抗原P24蛋白作为一种标志物,在HIV窗口期检测中有着极其重要的作用。本研究通过噬菌体展示技术在M13噬菌体gp3外壳蛋白上展示抗P24蛋白的单链抗体,利用噬菌体ELISA法检测HIV-1表面抗原P24蛋白。首先,PCR扩增p24基因,将其克隆到pET-28a表达载体中,转化BL21大肠杆菌,构建P24蛋白原核表达工程菌。通过IPTG诱导后,BL21大肠杆菌表达P24 His-tag融合蛋白,再通过镍柱纯化及超滤浓缩后得到浓度为1.8 mg/mL的P24蛋白。通过噬菌体ELISA检测P24抗原蛋白,其检测限可达93.5 ng/mL。
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