LKB1/STK11对细胞周期的调控及其抑瘤作用的初步研究

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Peutz-Jeghers综合征(PJS)是一种常染色体显性遗传疾病,表现为多发性错构瘤样肠息肉症,同时伴有口周、唇、颊部的黑色素斑。LKB1/STK11可能是抑癌基因,其胚系突变可以导致Peutz-Jeghers综合征的发生。LKB1/STK1定位于人19p13.3,整个基因跨度为23kb,包括10个外显子,其中的9个为编码区。其编码产物为一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。LKB1主要功能包括调节细胞周期阻滞、细胞极性、调控能量代谢、胚胎发育等,所有这些作用都可能需要它的肿瘤抑制功能参与,其机制可能是其本身参与或者是其调控作用参与。LKB1基因的失活性表达以低频率事件广泛存在于全身多种肿瘤中。 我们采用PCR的方法从胎肝文库中扩增得到LKB1的CDS区,连接至PGEM-T Easy载体,经测序证实后亚克隆至pcDNA 3.1(-)真核表达载体,采用脂质体2000转染Hela细胞(LKB1表达阴性),G418筛选、挑取单克隆并扩大培养。我们成功构建了LKB1的真核表达载体,获得了LKB1稳定表达的细胞株,为进一步研究LKB1的功能提供了细胞模型。我们对筛选获得稳定表达的Hela细胞株进行了细胞周期检测,发现G1期延长,与文献报道一致。此外,我们还进行了裸鼠荷瘤实验,发现LKBl稳定表达细胞株接种组较Hela对照组,肿瘤体积小、肿瘤倍增时间长。
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