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【目的】肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,居我国癌症死亡的第三位。大约80%的HCC与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染有关[1]。乙型肝炎病毒x蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)与HCC的发生与发展密切相关。Survivin是新近发现的一种IAP (inhibitor of apoptosis ,lAP)家族成员,特异性地表达于胚胎发育组织以及多数人类肿瘤细胞[2-4],通过特异性地抑制凋亡信号转导过程中最下游的效应分子caspase-3的活性而阻断凋亡的发生过程,在促进肿瘤的发生发展过程中具有重要的作用[5-6]。通过深入研究survivin与HCC的关系,以及研究乙型肝炎病毒感染与survivin表达的关系,有助于揭示HBV感染致HCC的发病机制,为临床对HCC的早期诊断和寻求新的治疗方向提供依据。【方法】1.病理标本收集病理标本取自1993-2003经手术切除并经病理诊断证实的HCC标本45例(其中带有癌旁肝硬化组织25例),肝硬化组织18例,肝炎组织5例。2.将病理切片应用免疫组化SP方法检测标本survivin蛋白及HBsAg蛋白的表达,采用χ2检验及spearman秩相关进行统计学分析,探讨survivin在HCC中的表达及其与HBV感染的关系。3 .收集HBV表达阴性的细胞株HepG2和HepG2来源的稳定转染HBV基因并持续表达HBV的细胞株HepG2.215 ,进行培养,用western-blot法和RT-PCR法检测survivin在两组细胞株中的表达,进行比较。【结果】1.免疫组化法检测结果显示,45例HCC中survivin阳性34例,阳性率为75.5%,癌旁肝硬化组织25例survivin阳性11例,阳性率为44.4%,肝硬化组织18例survivin阳性0例,肝炎组织5例survivin阳性0例,正常肝组织survivin为阴性。HCC组织survivin的阳性率高于癌旁组织和肝硬化组织和肝炎组织(P<0.001)。Edmondson分级Ⅰ～Ⅱ级16例,survivin阳性8例,阳性率50%,Ⅲ～Ⅳ级29例,阳性26例,阳性率89.6%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。本研究进一步对标本的背景资料进行分析,得出survivin表达与病理分级有关(P<0.05),而与年龄、性别、分期、肿瘤大小、转移无关(P>0.05)。在45例HCC中, 30例(66.7%) HBsAg阳性病例,其surivin阳性表达26例;15例(33.3%) HBsAg阴性病例,其surivin阳性表达8例。采用spearman秩相关进行统计学分析,得出survivin与HBsAg表达呈正相关(r=0.366, p=0.014)。2.Western-blot检测survivin的表达结果显示,survivin蛋白在HepG2细胞和HepG2.215细胞中均有表达;其中survivin在HepG2.215细胞中的蛋白含量明显高于HepG2细胞(P<0.05),而β-actin的表达量则没有区别。3. RT—PCR产物电泳结果显示,HepG2.215细胞中survivin mRNA的表达显著高于HepG2细胞(P<0.05),与上述Western-blot结果一致。【结论】1.本研究发现survivin在HCC组织中高表达,在癌旁组织中低表达,在肝硬化组织中和正常肝组织中不表达,提示survivin在肝癌的发生发展中起重要作用。为以survivin为靶点的肝癌基因治疗提供相应的了理论依据。2.本研究发现,survivin在HCC组织中的表达与病理分级有关,而与年龄、性别、分期、肿瘤大小、转移无关,提示survivin基因表达量可能与肝癌的恶性程度有关。3.本研究结果表明survivin与HCC组织中HBsAg的表达呈正相关,提示在HBV感染过程中可能会通过HBx蛋白的反式激活作用上调了survivin基因的表达,进而使肝细胞无限增殖,发展成为HCC。4.通过肝癌细胞株中survivin表达的检测,结果显示,在HepG2.215细胞中的蛋白定量表达明显高于HepG2细胞。这个结果与前面组织学的结果相符合,进一步证实了HBV感染与survivin表达存在相关性。有助于揭示HBV感染致HCC的发病机制。