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骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种潜在的癌症生物标志物,快速检测骨桥蛋白在护理诊断和生物医学应用方面有着巨大的应用前景。目前,大多数OPN检测平台都是依赖于体积较大的仪器,并且耗时、成本高。因此,我们利用等温链置换扩增技术(Isothermal chain permutation amplification,SDA)研发了一种OPN检测侧流生物传感器(Lateral flow biosensor,LFB),具有便于携带、成本低廉的优点。本研究分为三部分:一、构建OPN侧流生物传感器架构。由生物素修饰的适配体、样品垫、共轭垫、硝基纤维膜及吸收垫组成。二、核酸适配体的筛选与生物素的标记。通过筛选,得到两条实验所需的适配体。一条是捕获适配体(TGTGTGCGGCACTCCAGTCTGTTACGCCGCtagtc cagaagccgaacaa),另一条是扩增适配体(TGTGTGCGGCACTCCAGTCTGTTAC GCCGCtagtccagaagccgaacaagctgagg ATGAAGAACAACGGCT),进行合成并用生物素标记。三、参数的匹配与验证。本文主要通过检测金纳米粒子的浓缩倍数及粒径、不同体积的金纳米粒子共轭物和磁珠、不同p H样品垫缓冲液处理对LFB的影响,确定最佳实验条件。然后用生物素修饰的适配体进行OPN识别,并且通过共轭垫中链霉亲和素(Streptavidin,SA)修饰的金纳米粒子对不同浓度的OPN进行捕获,从而将人类骨桥蛋固定在显色试验线上。最后在LFB上可检测到0.1 ng/m L的人类纯化的骨桥蛋白,5 min内动态检测范围在10～500 ng/m L之间,虽然酶联免疫吸附(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法的灵敏度也很高,但是,该方法的效率远高于酶联免疫吸附法(2 h)。并且该侧流生物传感器能区分骨桥蛋白和高特异性干扰蛋白。因此,侧流生物传感器法是一种非常有前途的替代方法,可用于OPN的预防及检测,且具有商业化价值。