MGF纳米微球静电纺丝材料对人骨髓间充质干细胞生物学行为的影响

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载体支架、种子细胞、生物活性因子已成为组织工程三大重要因素。本课题以Yang等发现并命名的细胞对力刺激响应的产物——力生长因子(mechano-growth factor,MGF)为生物活性因子,采用静电纺丝技术(electrospinning)及相分离法制备了基于聚已内酯(polycaprolactone,PCL)的含MGF的葡聚糖纳米微球的纤维支架,采用从人的骨髓中提取的间充质干细胞(human bone mesenchymalstem cells,hBMSC)为种子细胞,从hBMSC生物学行为的差异来研究葡聚糖微球对MGF生物活性的保护作用。本课题主要包括以下几方面的内容:①hBMSC原代分离培养及鉴定利用密度梯度离心法,分离培养hBMSCs,观察细胞形态,采用CD34、CD73、CD14、CD90和CD105抗体荧光染色后流式细胞仪检测细胞表面标志,同时检测细胞周期状态,确定细胞纯度;使用脂肪分化、成骨分化诱导培养基诱导细胞多向分化,证实细胞的多向分化潜能,为后续的细胞实验提供种子细胞支持。②MGF纳米微球的制备和表征采取相分离法制备空微球和含MGF的纳米微球(MGF-Loaded dextran glassynanoparticles,MGF-DGNs),并采用场发射扫描电镜观察微球形态,为后续电纺纤维支架做准备。③静电纺丝材料的制备和表征采用静电纺丝技术,制备四种纤维支架,分别是单纯PCL溶液电纺(P);加200μgMGF水溶液于PCL溶液中搅拌均匀后电纺(PM);PCL溶液中加100mg葡聚糖空微球搅拌均匀后电纺(PD);加100mg含了200μgMGF的葡聚糖微球到PCL溶液中搅拌均匀后电纺(PDM)。并通过场发射扫描电镜(FESEM)、透射电镜(TEM)、傅里叶红外光谱(FTIR)、比表面积及孔隙度分析仪等表征手段检测支架的表面形貌及理化性质。④MGF对hBMSC生物学行为的影响在P、PM、PD、PDM四种不同的纤维支架上分别种植hBMSC,采用酶标仪和激光共聚焦显微镜(CLSM),观察细胞在材料表面的增殖与迁移情况,检测材料中释放的MGF对hBMSC生物学行为的影响。本课题研究结果表明含MGF的纳米微球支架能够显著促进hBMSC增殖和迁移,荧光实时定量PCR检测在PDM材料上面的hBMSC中MGF高表达。此静电纺丝纳米纤维能够较好的保护MGF的活性,有望在组织工程领域得到应用。
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