【摘 要】
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目的:本研究用DEX及RAPA干预C57BL/6J小鼠胚胎腭突间充质细胞后,通过检测小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬和凋亡水平的变化,探讨DEX影响小鼠胚胎腭突发育过程中自噬水平的变化,以及对小鼠胚胎腭突间充质细胞凋亡的影响。方法:获取胚胎14.5天的C57BL/6J小鼠其胚胎腭突组织,通过酶消化法获取小鼠胚胎腭突间充质原代细胞体外培养后,利用免疫组化法对其进行鉴定。继续培养小鼠胚胎腭突间充质细胞至第
【基金项目】
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遵义市科技计划资助项目（编号:遵市科合HZ字[2019]234号）；
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目的:本研究用DEX及RAPA干预C57BL/6J小鼠胚胎腭突间充质细胞后,通过检测小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬和凋亡水平的变化,探讨DEX影响小鼠胚胎腭突发育过程中自噬水平的变化,以及对小鼠胚胎腭突间充质细胞凋亡的影响。方法:获取胚胎14.5天的C57BL/6J小鼠其胚胎腭突组织,通过酶消化法获取小鼠胚胎腭突间充质原代细胞体外培养后,利用免疫组化法对其进行鉴定。继续培养小鼠胚胎腭突间充质细胞至第三代,根据不同的干预条件,将小鼠胚胎腭突间充质细胞随机分为Control组（常规培养）、DEX组(1×10-6mol/L地塞米松进行干预)、RAPA组（3μmol/L雷帕霉素进行干预）及DEX+RAPA组(1×10-6mol/L地塞米松+3μmol/L雷帕霉素进行干预),用以上几组细胞进行实验。实验1:Control组、DEX组、RAPA组和DEX+RAPA组细胞通过透射电镜观察各组自噬小体和/或自噬溶酶体的数量;实验2:提取Control组、DEX组、RAPA组和DEX+RAPA组的细胞总蛋白,利用Western blot技术检测自噬标志物LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、P62及凋亡标志物Caspase-3、Bcl-2、Bax的蛋白表达水平。结果:实验1:Control组中可见一定数量的自噬小体/自噬溶酶体,DEX组中部分细胞可见极个别自噬小体/自噬溶酶体,两组间的差异具有统计学意义（P＜0.05）;RAPA组细胞中可见大量自噬小体/自噬溶酶体,与Control组及DEX组相比差异均具有统计学意义（P＜0.05）;DEX+RAPA组细胞中可见数量较多的自噬小体/自噬溶酶体,与DEX组相比数量明显增多,两组间差异具有统计学意义（P＜0.05）,与RAPA组比较,其数量减少且差异具有统计学差异（P＜0.05）,而与Control相比,两者数量之间无统计学差异（P＞0.05）。实验2:（1）自噬相关蛋白:与对照组相比,DEX组中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达明显降低（P＜0.05）,P62表达明显升高（P＜0.05）;RAPA组中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达明显升高（P＜0.05）,P62表达明显降低（P＜0.05）;DEX+RAPA组中LC3Ⅱ/Ⅰ表达升高（P＜0.05）,Beclin1、P62表达无明显差异（P＞0.05）。与DEX组相比,RAPA组中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达明显升高（P＜0.05）,P62表达明显降低（P＜0.05）;DEX+RAPA组中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达明显升高（P＜0.05）,P62表达明显降低（P＜0.05）。与RAPA相比,DEX+RAPA组中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达明显降低（P＜0.05）,P62表达无明显差异（P＞0.05）。（2）凋亡相关蛋白:与对照组相比,DEX组中Bax、Caspase-3表达明显升高（P＜0.05）,Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;RAPA及DEX+RAPA组中Bax、Caspase-3及Bcl-2的表达无明显差异（P＞0.05）。与DEX组相比,RAPA组中Bax、Caspase-3表达明显降低（P＜0.05）,Bcl-2表达明显升高（P＜0.05）;DEX+RAPA组中Bax、Caspase-3表达明显降低（P＜0.05）,而Bcl-2表达明显升高（P＜0.05）。与RAPA相比,DEX+RAPA组中Caspase-3表达升高（P＜0.05）、Bcl-2表达降低（P＜0.05）,而Bax的表达无明显差异（P＞0.05）。结论:地塞米松可能通过抑制小鼠胚胎腭突间充质细胞自噬诱导其凋亡。
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