研究背景：据2008年第2次全国残疾人抽样调查统计，中国目前共有视力残疾1233万人，其中因角膜病致盲约400万人，角膜病为第2位致盲原因【1】。其中大部分角膜病致盲患者可以通过角膜移植手术重见光明。由于角膜供体来源严重匮乏，我国每年角膜移植手术的数量仅为4000~5000例，其中部分采用我国供体捐献角膜，保存方法以短期保存为主，多不超过24小时。小部分采用美国供体捐献角膜，保存方法以M-K液及Optisol液中期保存为主，保存时间4d-14d。极小部分采用长期冷冻或甘油保存。相比之下，中期保存角膜更有利于受体与供体对接，同时使受体获得质量较高角膜【2】。为使角膜盲患者提供进一步的复明机会，在我国角膜捐献不能满足实际临床需要之前，扩大角膜供体源，沈阳陆军总院采用美国捐献角膜，给角膜盲患者带来福音，但由于捐献及接收原因，无形中使角膜获得至临床应用的运输及保存时间延长，复杂及长时间的运输条件，对角膜保存技术及质量提出了更高要求，为使我国角膜盲患者用上合格高质量角膜，手术更可靠，要求对供体角膜质量进行快速、客观及系统评价，其中以内皮细胞活性及数目最为关键。而内皮细胞对于角膜移植，术后角膜移植排斥，角膜水肿等并发症有重要意义，评价内皮细胞经长途长时间复杂环境运输直至临床应用前活性及质量，从而探讨角膜中长期保存意义。本文研究对2012年3月至2013年3月我院接受美国捐献角膜共77例，总结如下。目的：评价中期保存角膜经复杂环境长时间长距离运输后的质量及临床适用性，进而为指导我国角膜保存及运输规范化提供依据。方法：对2012年3月~2013年3月我院接受并应用于临床的角膜77例按运输时间长短及采用保存液不同进行分组，通过对内皮细胞进行台盼蓝-茜素红染色、病理切片及扫描和透射电镜检查，对其内皮细胞数目、活性及超微结构系统分析。结果：1.内皮细胞存活率及数目：中期4d-7d（I）及8d-14d（II）保存组角膜内皮细胞数目无明显差异（P>0.05），且两组与超过14d（III）保存组之间存在明显差异（P<0.05），且细胞多呈六角形（图3）。M-K液及Optisol液保存组内皮细胞数目无明显差异（P>0.05）。2.内皮细胞存活率：超14d保存组（M-K液1例及Optisol液3例）内皮细胞存活率均明显下降，台盼蓝染色示细胞核大量蓝染（图1，2），不适用于临床，放弃穿透性及内皮细胞角膜移植。3.病理切片检查：筛选最佳病理切片（图4-9），可见I、II组角膜五层结构清晰，内皮细胞呈单层连续贴附于后弹力层后，细胞核深紫色，细胞壁完整。III组内皮细胞完全脱失。4.内皮细胞超微结构观察：4.1筛选最佳保存扫描电镜可见I组及II组角膜内皮细胞多呈六角形，连接紧密，大小均匀，表面平整，微绒毛丰富（图10），III组内皮细胞失去正常结构，间隙增大，部分细胞壁溶解，表面绒毛脱落（图11）。4.2对应透射电镜可见I组和II组角膜内皮细胞细胞膜和核完整，细胞核呈长椭圆形，且均匀平整，微绒毛丰富（图12）。III组内皮细胞部分核溶解，线粒体肿胀，内质网扩张，并有空泡形成（图13）。结论：1.美国眼库捐献角膜经中期保存，并经长途运输后内皮细胞活性及数目符合角膜移植临床标准【3】，适用于临床，其运输时间以4d-14d为宜。2.常用中期保存液M-K液及Optisol液均具有良好的保持角膜内皮细胞活性及数目作用，二者保存效果之间无明显差异。