脂氧素A4与转化生长因子—β1在恶性黑色素瘤发生、发展中的作用研究

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目的:恶性黑色素瘤(malignant melanoma,MM)是人类死亡率最高的肿瘤之一,而目前对晚期MM尚无有效的治疗手段。脂氧素(Lipoxins,LXs)是一类脂氧合酶作用于花生四烯酸后的代谢产物,具有促进炎症消退的作用,在多种肿瘤实验中表现出抗肿瘤特性。转化生长因子-β1(Transforming growth factor beta 1,TGF-β1)是一种多功能调节生长因子,参与调控细胞的生长、分化,与肿瘤的发生、发展有着密切关系。本实验拟对脂氧素A4(Lipoxin A4,LXA4)和TGF-β1在体外MM的发生、发展中的作用进行初步探讨。方法:采用免疫组化SP法检测正常皮肤和MM患者病变皮损中LXA4受体(lipoxin A4 receptor,ALX)和TGF-β1蛋白的表达水平。体外培养A375细胞(人恶性黑色素瘤细胞株),分组给予完全培养基、LXA4 factor(400nM)、TGF-β1 factor(50ng/ml)和两者共同刺激后,采用CCK8细胞增殖实验检测A375细胞的增殖情况,Transwell细胞侵袭实验检测MM细胞侵袭、转移能力,以及流式细胞仪凋亡实验检测MM细胞的凋亡情况。同时,应用Western Blot实验和qRT-PCR实验,分别从蛋白翻译和mRNA转录水平检测A375细胞中ALX和TGF-β1的表达情况。所有实验结果均采用SPSS17.0软件进行统计分析。结果:免疫组化结果显示,ALX、TGF-β1在MM组织中的表达均显著高于正常皮肤组织(p<0.05)。CCK-8细胞增殖实验结果显示,各时间点正常对照组生存率均较其余实验组高(p<0.05)。各组Transwell实验结果表明,TGF-β1 factor组侵袭细胞数量高于正常对照组,LXA4 factor组则低于正常对照组(p<0.05)。流式细胞仪凋亡实验结果显示,LXA4factor组凋亡细胞数量明显多于正常对照组(p<0.001)。在Western Blot实验和qRT-PCR实验中可以见到,LXA4作用细胞后ALX转录和翻译水平均较正常对照组明显增加(p<0.05),细胞TGF-β1转录和翻译水平则均较正常对照组有下降(p<0.05);而TGF-β1作用于A375细胞后ALX转录和翻译水平均较正常对照组有一定程度的下降(p>0.05),细胞TGF-β1转录和翻译水平则均较正常对照组增加(p<0.05)。结论:LXA4、TGF-β1与MM的发生、发展具有一定程度上的相关性;LXA4一定程度上抑制了MM细胞的增殖、侵袭、转移能力,对MM细胞的凋亡有明显的促进作用;TGF-β1对MM细胞表现出双重作用,早期抑制MM细胞的增殖,晚期促进MM的侵袭、转移;LXA4与TGF-β1共同刺激时表现为一定程度上的拮抗作用。
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