论文部分内容阅读
抗生素在饲料中的大量使用已经导致耐药性产生,影响生猪养殖产业的绿色健康发展。仔猪断奶阶段是消化道最为敏感的时期,既往主要依赖抗生素维持肠道健康和防止腹泻,在饲料全面禁抗情况下,抗生素替代物开发尤为重要。本研究通过橄榄提取物与抗生素添加的日粮作为对比,并以LPS作为致敏物,来评价橄榄提取物对断奶仔猪生长性能、抗氧化和抗炎能力以及肠道健康和肠道菌群的作用效果,为橄榄提取物替代抗生素的开发和应用提供技术支撑,也为寻找新型饲用抗生素的替代品提供新思路。1.橄榄提取物对断奶仔猪生产性能和肠道微生物的影响试验选用144头,初始体重平均为（11.0±0.91kg）的杜长大三元杂交断奶仔猪,按体重相似的原则随机分为3组,每组8个重复,每个重复6头仔猪。试验分为对照组（Con组）:饲喂基础饲粮;抗生素组（AB组）:饲喂添加金霉素和土霉素钙的基础饲粮;橄榄提取物组（OE组）:饲喂橄榄提取物添加量为3.0‰的基础日粮。试验全期37天,其中预实验7天。试验结束时,禁食24小时后称重,并挑选30头仔猪进行前腔静脉采血,采血后进行LPS（20μg/kg,BW）腹腔注射,4h后再次采血（组别名称为Con+LPS、AB+LPS和OE+LPS）;在禁食前一天采集仔猪的新鲜粪便。试验结果表明相比于对照组,仔猪的采食量提高4.74%、日增重提高10.13%、料重比减少4.59%,但均无显著差异（P>0.05）,;LPS 刺激之前,仔猪血清中 AST、ALT、SOD、T-AOC、MDA、GSH-Px、TNF-α、IL-6、D-xylose和DAO水平均无显著差异（P>0.05）,相比于Con组和AB组,OE组仔猪血清中TC和TG的水平显著降低（P<0.05）;经LPS刺激后,相比于Con+LPS 组,AB+LPS 和 OE+LPS 组仔猪血清中 AST、MDA、TNF-α、IL-6 和DAO水平显著降低（P<0.05）,SOD、T-AOC、GSH-Px水平显著升高（P<0.05）。粪便测序的分析表明,相比于AB组,Con组与OE组在α多样性中的chao1、PDwholetree和observedspeecies指数显著增加（P<0.05）,从β多样性的结果上看,通过未加权PCoA的OTU丰度矩阵表明Con组与OE组相似度较高,并明显分离于AB组;橄榄提取物的添加显著增加门水平中Firmicutes与Bacteroidetes 的比值以及属水平中 Phascolarctobacterium、Oscillibacter、Roseburia、ClostridiumXlVa、Paraprevotella、Parabacteroides、Oribacterium、Eubacterium、Dorea、Collinsella的相对丰度,降低Megasphaera和Desulfovibrio的相对丰度。由此可见,在断奶仔猪中添加橄榄提取物可以在一定程度上影响仔猪的采食量、日增重和料重比,并能增强仔猪抗氧化和抗炎能力,增加仔猪肠道有益菌群的丰富度,减少致病菌的丰富度,有利于仔猪的健康。2.橄榄提取物对脂多糖诱导的仔猪氧化应激、炎症、肠道绒毛和微生物群的影响本试验采用完全随机设计,将30头断奶仔猪（6.9±0.9 kg）分为5组,每组.6头。分别为空白对照组（C）:基础日粮;脂多糖对照组（CL）:基础日粮;橄榄提取物脂多糖组（OL）:添加2‰橄榄提取物的基础日粮;抗生素脂多糖组（AL）:添加金霉素和土霉素钙的基础日粮;橄榄提取物抗生素脂多糖组（OAL）:添加2‰橄榄提取物与金霉素和土霉素钙共同的基础日粮;喂养持续2周。注射脂多糖后4h对仔猪实施安乐死。检测血清抗氧化和炎症水平、检查小肠绒毛形态,并检测仔猪回肠内微生物区系。试验结果表明:与C组相比,CL 组仔猪血清 GSH-Px、SOD、ALB 水平显著降低（P<0.05）,MDA、NO、LDH、AST和ALT水平显著升高（P<0.05）。与C组相比,脂多糖的刺激可显著提高CL组血清 TNF-α、IL-6、D-xylose 和 DAO 的浓度（P<0.05）;与 CL 组相比,OL 组、AL组和OAL组仔猪血清TNF-α、IL-6、D-xylose和DAO水平显著降低（P<0.05）,IL-10水平显著升高（P<0.05）。仔猪的十二指肠、空肠和回肠的结果表明,与C组相比,CL组、OL组、AL组和OAL组因脂多糖的刺激导致绒毛高度和绒毛高度与隐窝深度之比显著降低（P<0.05）;隐窝深度显著增加（P<0.05）;与CL组相比,OL组、AL组和OAL组的绒毛高度和绒毛高度与隐窝深度之比显著升高（P<0.05）,且隐窝深度显著降低（P<0.05）。相比于C组,CL组回肠组织中紧密连接蛋白Claudin-3和Occludin的表达量显著降低（P<0.05）;相比于CL组,OL组、AL组和OAL组回肠组织中紧密连接蛋白Claudin-3和Occludin的表达量显著增加（P<0.05）。在回肠内容物测序的分析结果表明,日粮中添加橄榄提取物增加属水平Lactobacillus和Clostridium的相对丰度。由此可见日粮中添加橄榄提取物可以提高断奶仔猪的抗氧化和抗炎能力,改善肠道结构形态,增加紧密连接蛋白的表达量,增加肠道有益菌的数量,有利于仔猪的健康。我们通过两个仔猪试验,探究橄榄提取物在断奶仔猪上的应用,实验结果表明,日粮中补充橄榄提取物可以提高仔猪的采食量（4.74%）和日增重（10.13%）并降低料重比（4.59%）;并且可以增强断奶仔猪的肝功能、抗氧化能力和抗炎能力,从而减弱LPS的刺激;保障消化道的稳态;保障断奶仔猪肠道绒毛的完整度,增加十二指肠、回肠和空肠的绒毛长度,并减少隐窝深度;增强肠道屏障功能,提高回肠中紧密连接蛋白Claudin-3和Occludin的表达量;提高断奶仔猪肠道菌群的多样性和丰富度,并提高肠道内有益菌的丰度,降低致病菌的丰度。