【摘 要】
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目的探讨人参挥发性成分具体化学成分及其功能分析,网络药理学联合实验分析人参挥发性成分干预胃癌的分子机制和关键作用靶点。方法 1.采用溶剂浸提法提取人参挥发性成分,气相色谱-质谱联用仪（Gas Chromatography-Mass Spectrometer,GC-MS）联合TCMSP分析平台分析并筛选人参挥发性成分具体成分;采用SwissTargetPrediction工具和BATMAN-TCM工
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目的探讨人参挥发性成分具体化学成分及其功能分析,网络药理学联合实验分析人参挥发性成分干预胃癌的分子机制和关键作用靶点。方法 1.采用溶剂浸提法提取人参挥发性成分,气相色谱-质谱联用仪（Gas Chromatography-Mass Spectrometer,GC-MS）联合TCMSP分析平台分析并筛选人参挥发性成分具体成分;采用SwissTargetPrediction工具和BATMAN-TCM工具预测人参挥发性成分的作用靶点;网络药理学方法分析人参挥发性成分潜在靶点的功能、信号通路及涉及的疾病;2.网络药理学方法联合生物信息学手段分析人参挥发性成分干预胃癌的具体机制及关键靶点,筛选TOP4核心靶点;利用R studio工具分析TOP4核心靶点在胃癌中的表达情况并进行生存分析;收集经临床确诊的15例胃癌患者的癌组织及癌旁组织,免疫组化验证核心靶点在胃癌组织及癌旁组织中的表达;使用SwissDock平台进行虚拟分子对接,分析人参挥发性成分与核心靶点的结合能力。3.体外培养人胃癌细胞系（MKN-45、HGC-27）,采用不同剂量（0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL 和 250μg/mL）人参挥发性成分分别处理细胞24 h、48 h、72 h,CCK-8实验检测人参挥发性活性成分对胃癌细胞活性影响;选择合适的药物浓度及处理时间,设置低、高剂量药物浓度及空白对照处理MKN-45、HGC-27细胞,使用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测上述细胞凋亡情况,采用Western blot及荧光定量PCR检测EGFR、MAPK1、MAPK3、IL-6蛋白表达及mRNA水平。结果1.最终鉴定出人参挥发性成分的10个活性成分亚油酸、棕榈油酸、油酸、白菖烯、（+）-喇叭烯、人参环氧炔醇、8,11-十八二烯酸甲酯、苯基-BETA-葡萄糖吡喃糖苷、桉油烯醇、人参炔醇;筛选得到529个靶点基因,这些靶点基因本体（Gene ontology,GO）及京都基因与基因组百科全书数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）富集涉及脂质结合、氧化还原酶活性、离子迁移的调节、炎症介质对TRP（transient receptor potential,TRP）通道的调节作用、肿瘤相关通路等。2.胃癌靶点筛选共得到751个基因,利用Venn图分析人参挥发性成分的潜在靶点与上述胃癌靶点,得到67个重叠基因,将其作为人参挥发性成分干预胃癌的潜在靶点进行后续分析。上述基因GO功能主要涉及核受体的活性、激酶活性参与正向调节细胞迁移、MAPK级联调控,参与的信号通路主要涉及癌症通路、癌症中的蛋白聚糖、内分泌的阻力;进一步核心靶点筛选TOP4基因分别为:EGFR、MAPK1、MAPK3、IL-6。TOP4核心靶点在胃癌中表达分析显示,MAPK1在胃癌组织中高表达,显著高于对照组,差异有统计学意义。免疫组化实验验证,胃癌组织中的EGFR、MAPK1、MAPK3和IL-6蛋白表达阳性率明显高于癌旁组织（P＜0.05）;EGFR、MAPK1、MAPK3均与胃癌患者的生存情况显著相关,差异有统计学意义;模拟分子对接结果显示,人参挥发性成分中的亚油酸、人参炔醇、十八二烯酸甲酯、棕榈油酸、油酸与上述4个靶点的结合能都小于-5KJ/mol,均能够很好的结合。3.与对照组（0 μg/mL）相比,50、100、150、200、250 μg/mL浓度的人参挥发性成分均可显著抑制MKN-45、HGC-27细胞的增殖（P＜0.05）。随着人参挥发性成分浓度的提高及处理时间的增加,MKN-45、HGC-27细胞的活性逐渐下降,且人参挥发性成分对胃癌细胞增殖的抑制呈现剂量依赖性及时间依赖性。流式细胞检测分析显示,与对照组（Control）相比,低剂量和高剂量的人参挥发性成分均明显促进了MKN-45和HGC-27细胞的凋亡（P＜0.05）,且高剂量人参挥发性成分处理后的细胞凋亡率是低剂量处理的细胞凋亡率的2倍以上。Western blot及荧光定量PCR实验结果显示,人参挥发性成分显著抑制了 2种胃癌细胞系中的EGFR、MAPK1、MAPK3和IL-6蛋白及mRNA水平的表达,并且高剂量组的蛋白及mRNA水平显著低于低剂量组（P＜0.05）。结论人参挥发性成分具有一定的抗胃癌作用,并且这种作用可能是通过调控EGFR、MAPK1、MAPK3和IL-6等相关信号通路来实现的,人参挥发性成分具有治疗胃癌的潜力。
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