BMP-2、TGF-β3双基因修饰质粒在骨髓间充质干细胞内的表达及对增殖活性的影响

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目的:本实验旨在通过阳离子脂质体包埋BMP-2, TGF-β3双基因修饰质粒转染骨髓间充质干细胞,观察BMP2及TGFβ3在细胞内表达及对细胞增殖活性的影响,为下一步研究双基因表达载体对间充质干细胞成骨分化影响奠定基础。方法:全贴壁法培养兔骨髓间充质干细胞,进行原代和传代培养,取P2代细胞进行转染,分别将pIRES/BMP-2、 pIRES/TGFp3、 pIRES/BMP2-TGFp3及空质粒转染入干细胞,并设置空白对照组,转染两天后RT-PCR检测各组BMP2及TGFβ3的表达情况,绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间,比较各组干细胞的增殖情况。结果:pIRES/BMP2-TGFβ3转染组BMP2及TGFβ3mRNA含量高于单基因组及空白对照组(p<0.05),双基因均可获得稳定表达;双基因组细胞倍增时间较单一组及空白对照组明显缩短(p<0.05),双基因组具有良好的促进BMCs增殖作用。结论:双基因修饰质粒转染干细胞可以再细胞内获得稳定的表达,并具有良好的协同促干细胞增殖活性,为进一步研究双基因质粒对诱导间充质干细胞成骨的影响及两者之间的协同效应提供理论基础。
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