【摘 要】
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目的:（1）应用p75富集结膜上皮干细胞,探究其对结膜缺损的修复能力及作用机制。（2）明确海藻糖通过促进自噬治疗结膜纤维化的作用及机制。方法:（1）应用免疫磁珠法富集p75强阳性的结膜上皮细胞,采用RT-PCR、western blot（WB）、免疫荧光染色（ICC）、克隆形成、CCK-8实验检测其干细胞特性及体外增殖能力;p75强阳性细胞复合羊膜基底膜构建功能性结膜组织,应用于兔结膜缺损模型检测
【基金项目】
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国家自然科学基金（项目编号:81770888）； 上海市科委基础研究项目（19JC1411703）；
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目的:（1）应用p75富集结膜上皮干细胞,探究其对结膜缺损的修复能力及作用机制。（2）明确海藻糖通过促进自噬治疗结膜纤维化的作用及机制。方法:（1）应用免疫磁珠法富集p75强阳性的结膜上皮细胞,采用RT-PCR、western blot（WB）、免疫荧光染色（ICC）、克隆形成、CCK-8实验检测其干细胞特性及体外增殖能力;p75强阳性细胞复合羊膜基底膜构建功能性结膜组织,应用于兔结膜缺损模型检测其修复能力;通过WB、ICC探究NGF-p75-SALL2信号通路参与调控结膜损伤修复过程的作用机制。（2）WB、ICC检测TGF-β1诱导前后结膜下成纤维细胞纤维化及其自噬水平的改变;自噬激动剂雷帕霉素或抑制剂氯喹分别激活或抑制自噬,检测自噬对纤维化水平的影响;WB、ICC验证海藻糖通过上调自噬实现治疗结膜纤维化的效果。结果:（1）p75强阳性细胞具有干细胞特性,高表达干性标志物的同时低表达分化指标,具备较强的克隆形成能力和增殖能力,能够在体外构建结构完整的复层结膜上皮,移植至兔结膜缺损模型后呈现最佳修复效果;NGF通过激活p75改变SALL2的亚细胞定位,促进结膜上皮干细胞分化,pro NGF的作用相反。（2）TGF-β1诱导结膜纤维化后细胞自噬水平升高;激活自噬抑制SMAD2磷酸化,降低由TGF-β1引起的αSMA表达水平升高和细胞外基质积累,而抑制自噬加重结膜纤维化;海藻糖通过激活自噬抑制SMAD2磷酸化减轻结膜纤维化。结论:（1）p75强阳性结膜上皮细胞具有干细胞特性并适用于结膜重建,NGFp75-SALL2信号通路对结膜上皮干细胞分化起到调控作用;（2）海藻糖通过激活自噬起到对结膜纤维化的治疗作用。
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