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目的:基于全基因组测序(WGS,Whole-genome Sequencing)对分离自深圳地区临床拟诊感染病例的不动杆菌(Ab,acinetobacter)进行菌种鉴定和多位点测序分型(wgMLST,Whole-genome Whole-genome multilocus sequence typing),精确展示Ab临床分离株的种属分布状态,了解Ab不同种属菌株在临床感染患者不同来源部位或不同免疫状态人群中的分布情况以及基于Oxford或Pasteur wgMLST分型的分子流行病学特征,并通过HvcT毒力基因检测和大蜡螟幼虫感染杀灭试验评价Ab不同种属或不同wgMLST基因型与其致病性的相关性。方法:309株不动杆菌分离自2014年度至2017年度深圳地区拟诊感染的住院患者,采用生化反应或飞行质谱检测技术进行不动杆菌种属的常规鉴定,基于全基因组测序进行菌种的精确识别和毒力因子分析,在PubMLST数据库进行Oxford或Pasteur wgMLST的等位基因位点比对和ST基因型确认,大蜡螟幼虫感染杀灭试验进行不动杆菌致病性的体内检测。结果:1、基于全基因组测序(WGS,Whole-genome Sequencing)对309株深圳地区临床分离和生化鉴定的不动杆菌进行精确识别,共鉴定出251株(81.23%)鲍曼不动杆菌(A.baumannii)和58株(18.77%)非鲍曼不动杆菌(non-A.baumannii)。non-A.baumannii亚种中以A.nosocomialis(7.44%)、A.pittii(5.18%)、A.soli(1.62%)、A.junii(1.62%)最为常见;其中A.sp.809848-like、A.sp.NCTC7422-like、A.sp.NIPH817-like这3株菌与已知命名的不动杆菌平均单核苷酸同源性(ANI,average nucleotide identity)小于95%,可能为不动杆菌属新亚种。2、A.baumannii在潜在免疫功能低下患者所在科室(ICU、RICU、EICU、新生儿科、肾内科、老年病科、血液内科、肿瘤科)的分离率明显高于普通科室(74.9%vs 25.1%),non-A.baumannii则明显较低(37.93%vs 62.07%),统计学比较有明显差异(χ~2=27.851,P=0.00)。3、A.baumannii与non-A.baumannii在潜在感染部位(来自血流、腹水、胸水、脑脊液等人体无菌部位)与潜在定植部位(来自上下呼吸道、尿液、各种引流液等可能存在定植菌部位)的分布构成比,经统计学比较差异无显著性(χ~2=0.772,P=0.232)。4、基于Oxford wgMLST分型系统,本研究251株A.baumannii中以ST195型(42.63%)、ST457型(19.52%)、ST136型(17.13%)较为常见,15株(5.98%)属未能识别的NewST型;58株non-A.baumannii中则以ST1343型(8.62%)、ST1740型(6.90%)、ST948型(3.45%)较为常见,42株(72.41%)属未能识别的NewST型。有34株不动杆菌在Oxford基因分型数据库获得30个NewST型,其中A.baumannii 10株共获得10个NewST型、non-A.baumannii 24株共获得20个NewST型。5、基于Pasteur wgMLST分型系统,本研究251株A.baumannii中以wgMLST基因型以ST2型226株(90.04%)最为常见,5株(2.00%)属未能识别的的NewST型;58株non-A.baumannii中则以ST768型(10.35%)、ST410型(8.62%)、ST217型(6.90%)、ST68型(5.17%)较为常见,27株(46.55%)属未能识别的NewST型。有31株不动杆菌在Pasteur基因分型数据库获得31个NewST型,其中A.baumannii 5株共获得5个NewST型、non-A.baumannii 26株共获得26个NewST型。6、A.baumannii潜在感染株(分离自血流、腹水、胸水、脑脊液等人体无菌部位)与潜在定植株(分离自上下呼吸道、尿液、各种引流液等可能存在定植菌部位)的Oxford wgMLST分型总体分布构成比,经统计学比较有显著性差异(χ~2=164.101,P=0.000)。其中,ST457型A.baumannii在潜在感染株中的检出率(63.27%vs 36.73%)较高,与其它常见ST型菌株比较有显著统计学差异(χ~2=18.029~84.809,P=0.000);NewST在潜在感染株中也有较高检出率(78.57%vs 21.43%),与其它常见ST型菌株比较有显著统计学差异(χ~2=6.217~123.021,P=0.000~0.009)。7、本研究309株不动杆菌来源患者总体死亡率为26.86%(83/309),比较不同Oxford wgMLST型相关患者死亡率存在统计学显著性差异(χ~2=69.36,P=0.00);其中,ST457型不动杆菌相关患者死亡率(53.06%)显著高于其它ST型相关患者(P=0.00),ST195型相关患者死亡率(31.78%)和ST208型相关患者死亡率(23.81%)稍低,但也显著高于其它ST型(除外ST136型)相关患者。8、采用大蜡螟幼虫感染杀灭试验评价不动杆菌的体内致病性,在常见ST型A.baumannii中,ST457型菌株具有较高致病性,同种ST型A.baumannii的致病性可能存在差异。部分NewST型A.baumannii及部分non-A.baumannii菌株的累积时间生存率与ST457型菌株进行统计学比较未见显著性差异(P<0.05)。9、本研究309株不动杆菌中经序列分析及PCR检测仅49株A.baumannii菌株携带了HvcT基因,HvcT基因阳性菌株感染入血流发生率较高(58.06%),且均为Oxford wgMLST分型ST457型菌株,其临床相关病例死亡率高达53.06%(26/49)。采用生物信息学技术对部分A.baumannii的Oxford wgMLST分型株进行毒力因子基因分析,初步分析结果提示其毒力基因分布与Oxford wgMLST分型和菌株耐药表型具有一定相关性。结论:1、Ab临床分离株中以A.baumannii为主要菌株(81.23%)。2、A.baumannii中以Oxford ST195型、ST457型、ST136型为常见;non-A.baumannii中以Oxford ST1343型、ST1740型、ST948型为常见。3、机体免疫状态与A.baumannii机会性感染相关;non-A.baumannii的感染致病的影响因素可能较为复杂,有待进一步研究。4、ST457型或部分NewST型菌株可能为高毒力株;ST分型结果有助于评估Ab的致病性,预判其感染病例的临床转归。5、不同ST型或同种ST型菌株的致病性可能存在差异,ST分型与致病性的关联机制有待进一步研究阐述。6、non-A.baumannii菌株中也存在部分具有强致病性的种属或ST型菌株。