论文部分内容阅读
目的：探讨循环miR-188-5p检测在乳腺癌诊断中的作用，明确miR-188-5p对乳腺癌调控作用及分子机制。 方法：收集50例健康体检者血清标本，40例乳腺纤维腺瘤和45例乳腺癌患者手术前后血清标本。提取各组血清中miRNA，采用qRT-PCR检测血清miR-188-5p的含量，比较健康体检者、乳腺纤维腺瘤术前和乳腺癌术前血清中miR-188-5p的表达量，分析其与临床病理资料相关性；采用ROC曲线分析血清miR-188-5p在乳腺癌中的诊断价值；比较手术前后血清中miR-188-5p含量变化，分析其在手术疗效观察中作用。采用qRT-PCR检测比较乳腺癌细胞MAD-MB-231和MCF-7中miR-188-5p的表达量，将miRNA mimics和inhibitor分别转染不同乳腺癌细胞，采用Transwell迁移实验、平板克隆形成实验分析miR-188-5p对乳腺癌细胞的增殖和迁移能力的调控作用。同时检测并分析相应乳腺癌细胞来源exosome中miR-188-5p的含量。采用靶基因预测、荧光素酶报告基因检测确定miR-188-5p下游调控的靶基因。乳腺癌细胞中靶基因mRNA及蛋白表达检测和临床组织切片免疫组化分析，验证miR-188-5p下游调控的靶基因。 结果：血清miR-188-5p含量在健康体检组、乳腺纤维腺瘤术前组及乳腺癌术前组中逐渐增加，差异显著。与术前血清相比，乳腺癌术后血清miR-188-5p表达量明显下降；乳腺癌术前血清中miR-188-5p的含量与有无腋窝淋巴结转移、肿瘤分期及ki67表达相关。ROC曲线分析血清miR-188-5p在鉴别非乳腺癌（健康人群和乳腺纤维腺瘤）和乳腺癌时，AUC值为0.894（95%CI：0.840-0.947），Cut off值为1.000；在鉴别乳腺癌与乳腺纤维腺瘤时， AUC值为0.814 （ 95%CI：0.727-0.902），Cut off值为0.995。miR-188-5p在MDA-MB-231中表达量显著低于MCF-7。miR-188-5p mimics转染MDA-MB-231过表达miR-188-5p，能够抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移。反之，miR-188-5p inhibitor转染MCF-7敲减miR-188-5p，能够促进乳腺癌细胞的增殖和迁移。MDA-MB-231来源exosome较MCF-7 分泌的exosome高度富集miR-188-5p。靶基因预测及荧光素酶报告基因检测确定IL6ST是miR-188-5p下游调控靶基因。在MDA-MB-231中高表达miR-188-5p可降低IL6ST mRNA和蛋白的表达水平，在MCF-7中低表达miR-188-5p可上调IL6ST mRNA和蛋白的表达水平。有淋巴结转移的乳腺癌组织中IL6ST表达量和阳性率均高于乳腺纤维腺瘤及无淋巴结转移乳腺癌组织。 结论： 循环miR-188-5p有望成为乳腺癌诊断新的非创伤性分子标志物。miR-188-5p可能通过靶向作用IL6ST调控乳腺癌细胞的增殖和迁移,在乳腺癌中发挥抑癌基因作用。