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生长分化因子9(growth differentiation factor 9 GDF9)基因是由卵母细胞分泌的一种生长因子,它对早期卵泡的生长和分化起着重要的调节作用。本研究分析了生长分化因子9基因的多态性,探索该基因与济宁青山羊高繁殖力之间的关系,为我国开展济宁青山羊高繁殖力的遗传学基础研究提供科学依据。 本研究根据绵羊GDF9基因序列设计引物扩增山羊GDF9基因的外显子1和外显子2。克隆测序后连接出山羊GDF9基因的外显子1长度为397bp,与绵羊外显子1的同源性为99%(395/397),外显子2长度为965bp,与绵羊外显子2的同源性为98%(955/965)。将山羊GDF9基因外显子1和2的编码区翻译成氨基酸,共有453个氨基酸,其中蛋白前体有318个氨基酸,成熟蛋白由135个氨基酸组成,与绵羊、奶牛和人的GDF9的氨基酸进行比对,发现它们的同源性分别为95%、92%和76%。 应用PCR-SSCP技术对山羊的生长分化因子9基因进行多态性分析。所设计的6对引物扩增产物中共有3对发现了多态,引物1经SSCP分析虽然没有发现多态但经克隆测序却在外显子1编码区前-4bp处检测到A→C的突变。引物2共发现两处碱基突变,分别位于在外显子1第183bp处有一个A→C的突变和第336bp处有一个C→T的突变,但没有导致氨基酸改变;引物3在外显子2第26bp处发现了A→G的突变,没有导致氨基酸改变;引物6在在外显子2的第792bp处有一个G→A的突变,并且导致第397位的缬氨酸(Val)突变成异亮氨酸(Ile)。 对济宁青山羊、文登奶山羊、辽宁绒山羊、北京本地羊、波尔山羊5个山羊品种具有多态性的引物的扩增片段进行x~2适合性检验:引物2扩增片段在这5个山羊品种群体中都保持了Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);引物3扩增片段在济宁青山羊、北京本地羊和波尔山羊群体中的分布都极显著地偏离了Hardy-Weinberg平衡(P<0.01),而在文登奶山羊和辽宁绒山羊中都保持了Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);引物6扩增片段在济宁青山羊群体中极显著偏离了Hardy-Weinberg平衡(P<0.01),而在文登奶山羊、辽宁绒山羊、北京本地羊和波尔山羊中都保持了Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。引物2扩增片段在有产羔记录的济宁青山羊保持了Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),引物3和引物6的扩增片段在有产羔记录的济宁青山羊极显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.01)。 对有产羔记录的济宁青山羊群体的每个突变位点与它的产羔数进行最小二乘分析,结果表明:AA型和AB型济宁青山羊产羔数最小二乘均值分别比BB型多1.04只(P<0.01)和0.75只(P<0.01),AA型比AB基因型济宁青山羊产羔