准分子激光角膜屈光术后皮质类固醇性高眼压发病机制的初步研究

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目的通过回顾性分析准本院准分子激光角膜屈光术(laser keratorefractive surgery,LKRS)后皮质类固醇性高眼压(glucocorticoid-induced ocular hypertension,GIOH)的发病率及临床相关因素,检测GIOH患者泪液总蛋白和各蛋白成分的变化,并分析其糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)基因多态性的变化,探讨GIOH的发病机制。方法实验分以下三部分第一部分LKRS后GIOH临床相关因素分析回顾性分析LKRS后2060例患者,计算GIOH的发病率;对其中88例GIOH患者及随机选择的125例正常眼压者,采用Logistic回归分析GIOH与年龄、性别、眼别、最大径线屈光度、最大径线曲率、切削深度、眼底杯/盘比(C/D)值及术前眼压的相关性。第二部分LKRS后GIOH泪液蛋白变化研究对象:LKRS术前组、术后1周地塞米松(dexamethasone,DEX)组、、术后1周氟米龙(fluorometholone,FML)组、术后1月组、术后3月组各10例,术后高眼压组23例。方法:1.毛细管法取基础泪液5ul,-20℃保存备用;2.BCA法测泪液总蛋白浓度;3.泪液SDS-PAGE,Bio-Rad图像分析系统分析泪液中各种蛋白的变化。第三部分GR基因多态性分析研究对象:重庆地区健康人266名,准分子激光角膜屈光术后GIOH患者39人,正常眼压者37人,POAG患者11人。方法:1.所有受试者均取外周静脉血1ml,提取全血DNA;2.对重庆地区健康人进行GR基因分型,并计算各位点SNP发生频率。基因分型方法:根据GR基因ER22/23EK、N363S和BclⅠSNP位点设计PCR引物,PCR扩增后,选择合适的限制性内切酶进行酶切及电泳鉴定;3.哈迪—温伯格(Hardy-Weinberg,H-W)平衡分析;4.根据健康人GR基因分型的结果,对LKRS后GIOH患者、正常眼压者及POAG患者进行GR基因BclⅠ位点、N363S位点SNP分型5.分别对各组进行哈迪—温伯格(Hardy-Weinberg,H-W)平衡分析6.计算各组SNP发生频率,并分析SNP与GIOH和POAG的关系,比较组间差异。结果1.LKRS后GIOH发病率为3.5%;GIOH的发生与患者眼底C/D值明显相关;2.泪液总蛋白:LKRS后1周DEX组明显高于其它各组;LKRS后高眼压组各时间点的变化趋势同正常眼压组;3.LKRS后GIOH患者泪液溶菌酶及乳铁蛋白浓度增加;4.重庆地区健康人中未发现GR基因编码区ER22/23EK、N363S多态性,而发现有内含子BclⅠ位点多态性存在,G等位基因发生频率为23.5%;H-W平衡分析发现所选人群符合H-W平衡。5.LKRS后正常眼压和高眼压患者GR基因BclⅠ位点SNP发生频率分别为21.62%、18.29%,两者间无显著差异;6.POAG患者GR基因N363S和BclⅠ位点SNP发生频率分别为0、33.3%,与其他各组间无显著差异。结论LKRS后GIOH的发病率为3.5%,GIOH的发生与患者视乳头杯/盘比值明显相关;LKRS后早期泪液总蛋白浓度增加,GC由DEX改为FML后泪液总蛋白浓度降低,推测与DEX的强效抗炎、抗免疫和对间叶组织的作用有关;观察到LKRS后GIOH患者泪液溶菌酶及乳铁蛋白浓度增加的现象,其机制有待进一步研究。重庆地区人群中GR基因无ER22/23EK及N363S多态性存在,与白种人不同,而与日本人相似;存在BclⅠ位点SNP,但发生频率为23.5%,较白种人低。LKRS后GIOH患者与正常眼压患者、健康人群、POAG患者在GR基因N363S位点和BclⅠ位点SNP发生频率上无显著差异;虽然GR基因N363S和BclⅠ位点多态性与GC敏感性增强有关,但与GIOH、POAG的发生之间没有统计学关联,推测GR基因内或GR基因外可能存在其它与GIOH、POAG发生有关的多态性。
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