论文部分内容阅读
目的： 检测胃癌组织和相邻非癌组织、胃癌细胞及其培养上清和胃癌患者与胃良性疾病患者、健康对照的血清外泌体（exosome）中抗分化非编码RNA（anti-differentiation noncoding RNA，DANCR）的表达水平差异并分析其应用价值。同时，通过分析DANCR敲低、过表达对胃癌细胞的影响，来判断DANCR作为新的诊断性生物标志物的可行性。 方法： 提取65例胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织，胃癌和胃黏膜上皮细胞系细胞及培养上清，51例胃癌患者、12例胃炎患者及32例健康者血清外泌体中总RNA，逆转录成cDNA，采用PCR检测DANCR的相对表达水平，分别分析与临床病理资料的相关性，并绘制ROC曲线评价其诊断效能。 使用针对DANCR的shRNA敲低胃癌细胞系MGC-803、BGC-823，使用qRT-PCR验证DANCR在转染细胞中的敲低效率；集落形成试验验证DANCR敲减显著抑制MGC-803和BGC-823细胞的集落形成能力；通过流式细胞术分析检查DANCR敲低对胃癌细胞中细胞周期的影响；transwell迁移实验测试DANCR对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。 在含有相对低水平的DANCR的MKN45细胞中过表达DANCR，通过使用qRT-PCR验证DANCR过表达的效率。 结果： DANCR在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织（P<0.001）。开发ROC来研究DANCR在胃癌组织中的诊断价值。AUCROC为0.704（95％置信区间（CI），0.616-0.793，P<0.001），敏感性和特异性分别为64.6％和67.7％。高表达DANCR的胃癌患者易发生大肿瘤（P=0.001），淋巴结转移（P=0.000），浸润深度（P=0.028）和晚期TNM分期（P=0.009），与性别、年龄、分化程度及血管或神经受累无关。 DANCR在胃黏膜上皮细胞GES-1中含量(1.01±0.01)，明显低于人胃癌细胞HGC-27(4.43±0.37)，差异有统计学意义(t=13.106，P＜0.05)。DANCR的表达水平在GES-1培养上清exosome(1.01±0.20)，显著低于胃癌细胞HGC-27培养上清exosome(3.06±0.14)，差异有统计学意义(t=20.006，P＜0.05)。与正常胃黏膜上皮细胞系相比，大多数胃癌细胞系中的DANCR表达也上调。 胃癌患者、胃炎患者和体检健康者血清exosome中DANCR含量分别为[5.060(1.380,22.785)]、[0.535(0.340,1.380)]和[1.200(0.605,1.655)]，胃癌患者血清exosome中DANCR含量明显高于胃良性疾病患者和体检健康者exosome中DANCR含量(Z=-3.409,P＜0.01；Z=-4.229,P＜0.01)，且与肿瘤大小、TNM分期以及淋巴结转移相关。胃良性疾病患者与健康体检者相比，血清exosome中DANCR含量无统计学差异(Z=-1.308,P＞0.05)。胃癌患者血清exosome中DANCR的AUCROC=0.777，95%可信区间(CI)为(0.678-0.876)，当cut-off值为2.50时，DANCR诊断的敏感性为68.6%，特异性为84.4%。而CEA的AUCROC=0.537，CA-199的AUCROC=0.596，明显可以看出，血清exosome中DANCR对胃癌的诊断效能高于CEA和CA-199。 DANCR敲低抑制胃癌细胞的体外和体内增殖，诱导胃癌细胞的细胞周期停滞和细胞凋亡，抑制胃癌细胞的迁移和侵袭；DANCR过表达促进胃癌细胞的增殖，迁移和侵袭。 结论： DANCR在胃癌细胞及培养上清、胃癌患者的肿瘤组织和血清中上调。DANCR表达升高与胃癌的恶性进展有关。DANCR通过加速细胞周期进程，抑制细胞凋亡和诱导EMT，促进胃癌细胞增殖，迁移和侵袭，DANCR在胃癌中起着致癌作用，并有可能作为一种新的胃癌诊断性生物标志物。