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本文以条斑紫菜(Porphyra yezoensis Ueda 03B)自由丝状体和坛紫菜(Porphyrahaitanensis)自由丝状体为实验材料,分别用包埋脱水法和包埋-玻璃化法对两种材料进行了超低温(-196℃)保存研究。 (一) 条斑紫菜自由丝状体的包埋脱水法超低温保存 在条斑紫菜自由丝状体的包埋脱水法保存中,将丝状体包埋在含有3%褐藻酸钙的胶球中,经硅胶吸湿法脱水后,探讨了脱水速率、含水量及化冻后恢复方法对冰冻保存存活率的影响。结果表明: 1.脱水速率对存活率的影响 包埋后,分别以7.5%、10%、12.5%、15%、20%的平均脱水速率(%含水量/h)进行脱水,结果丝状体在15%含水量/h的较高脱水速率下获得最高存活率。 2.含水量对存活率的影响 以15%含水量/h的脱水速率进行脱水,至胶球含水量分别为鲜重的10%、15%、20%、25%、30%、40%和50%,结果胶球含水量为鲜重的15%的时候获得了最大存活率。 3.化冻后恢复方法对存活率的影响 化冻后,条斑紫菜03B的丝状体在培养基中室温暗放置24h后存活率最高;条斑紫菜03C的丝状体在培养基中室温下暗放置6h后存活率最高。 (二) 坛紫菜自由丝状体的包埋-玻璃化法超低温保存 在坛紫菜的包埋-玻璃化法保存中,将丝状体包埋在含有3%褐藻酸钙的胶球中,用25%PVS(玻璃化保护液)溶液装载后,用100%PVS溶液进行脱水处理,探讨了PVS处理时间、装载液处理时间以及复温后不同洗涤液对存活率的影响。结果表明: 1.PVS处理时间对存活率的影响 包埋后,用100%PVS溶液对胶球进行脱水处理,处理时间分别为2min、5min、10min、20min、30min,结果处理5min的丝状体存活率最高,为20.3%。 2.装载液处理时间对存活率的影响 将包埋后的胶球用25%PVS溶液装载处理不同时间(Smin、10min、15min、20min、30min)后,用100%PVS处理20分钟,结果用25%PVS装载15min后丝状体获得最大存活率。 3.洗涤液对存活率的影响 复温后,采用了四种不同的洗涤液:1.0M山梨醇、PES培养基、灭菌海水和1.2M蔗糖。结果表明洗涤液对存活率的影响不是很大。存活率均在40%以上,其中采用1.0M山梨醇洗涤可获得最大存活率为44.6%。