论文部分内容阅读
绝大多数急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)为轻型,不伴有器官功能衰竭,病程呈现出自限性过程;而部分AP则并发器官功能衰竭,病死率高达20%左右,即重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)。同一种疾病为何疾病过程截然不同?2012年AP修订版的亚特兰大分型发布以后,有学者提出"免疫紊乱学说"来试图解释这一问题,他们认为AP本质上是一种全身性的炎症免疫紊乱,AP的轻重是由免疫细胞及其释放的炎症因子等共同参与的炎症免疫反应强弱所决定的。首先,免疫细胞及其释放的炎症因子与胰腺腺泡细胞内的核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)等构成了腺泡细胞损伤的恶性循环,将局部的炎症放大;与此同时,他们通过循环系统将局部的炎症传递到全身,形成全身性炎症,最终导致远隔器官的损伤。因此,免疫细胞在SAP发病机制中扮演重要角色,是SAP治疗的潜在靶点。之前的研究表明,CD4+T淋巴细胞在SAP中介导组织损伤,因此,我们推测CD4+T淋巴细胞可能在SAP早期的炎症免疫反应中发挥重要作用。本课题基于"免疫紊乱学说",我们动态观察CD4+T淋巴细胞在SAP早期过程中的变化,并分析CD4+T淋巴细胞与胰腺损伤之间的关系。然后通过药物早期抑制SAP小鼠体内的CD4+T淋巴细胞迁移,观察对机体炎症反应、胰腺及远隔器官损伤的影响。因此,本研究包括以下两个部分:第一部分重症急性胰腺炎早期CD4+T淋巴细胞的变化及其与炎症反应的关系研究目的:动态观察CD4+T淋巴细胞在SAP早期过程中的变化,并分析CD4+T淋巴细胞与炎症反应及胰腺损伤之间的关系。研究方法:以雨蛙素腹腔注射法诱导AP小鼠模型,50ug/kg/h*4次或8次,每小时注射1次,分别于首次注射后5h、9h、13h、18h、24h、48h处死小鼠,观察各时间点小鼠外周血炎症因子TNF-α和IL-6的水平、外周血CD3e+T淋巴细胞所占淋巴细胞比例、CD3e+CD4+T淋巴细胞所占淋巴细胞比例、CD3e+CD4+T淋巴细胞/CD3e+CD8a+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞在胰腺和结肠粘膜内的浸润情况以及胰腺病理。结果:首次腹腔注射雨蛙素后5h,与对照组相比,小鼠血清TNF-α和IL-6的水平明显上升(p<0.05),外周血CD3e+T淋巴细胞占淋巴细胞比例、CD3e+CD4+T淋巴细胞占淋巴细胞比例、CD3e+CD4+T淋巴细胞/CD3e+CD8a+T淋巴细胞均显著升高(p<0.05),CD4+T淋巴细胞在胰腺和结肠粘膜内的浸润显著增多(p<0.05),在第13～18小时达到最值。胰腺的病理损伤在雨蛙素注射后逐渐加重,在第18小时最重。胰腺组织病理学评分与机体的炎症免疫反应之间有良好的相关性(p<0.001,r>0.5),尤其是与CD4+T淋巴细胞在外周组织(外周血、胰腺、结肠粘膜)中的浸润之间(p<0.001,r>0.7)。结论:SAP早期随着炎症反应的开始,CD4+T淋巴细胞在外周组织中的浸润逐渐增加,机体的炎症免疫反应逐渐增强。胰腺损伤与机体的炎症免疫反应之间有良好的相关性,尤其是与CD4+T淋巴细胞在外周组织中浸润之间。第二部分抑制CD4+T淋巴细胞对重症急性胰腺炎早期炎症反应的影响研究目的:通过药物早期抑制SAP小鼠体内的CD4+T淋巴细胞迁移,观察对机体炎症反应、胰腺及远隔器官损伤的影响。研究方法:以雨蛙素腹腔注射法建立SAP小鼠模型,50ug/kg/h*8次,每小时注射1次。分别于首次注射雨蛙素后Oh和12h两次通过灌胃的方式给予免疫抑制剂SEW2871 20 mg/kg,24h后处死小鼠。评估CD45+CD4+T淋巴细胞在外周血淋巴细胞中所占比例、CD4+T淋巴细胞在胰腺和结肠粘膜内的浸润情况、胰腺和肺的病理损伤、血清淀粉酶和脂肪酶的活性、血清IL-6和TNF-α的水平、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)在组织(肝脏、肺、胰腺)内的活性、胰腺内的CD4+T淋巴细胞相关的促炎细胞因子产物mRNA的表达情况、胰腺内信号传导子及转录激活子(signal transducer and activator of transcription,STAT)3和磷酸化的STAT3(phospho-STAT3,p-STAT3)的表达情况。结果:早期实施SEW2871抑制CD4+T淋巴细胞在外周组织(外周血、胰腺、结肠粘膜)中的浸润,显著减轻了 SAP小鼠的胰腺和肺的病理损伤,降低了血清胰酶活性和血清炎症因子水平,抑制了组织(肝脏、肺、胰腺)内的MPO活性。此外,胰腺内CD4+T淋巴细胞相关的促炎细胞因子mRNA和胰腺内p-STAT3的表达也为SEW2871治疗所抑制。结论:早期给予SAP小鼠SEW2871治疗,通过抑制CD4+T淋巴细胞在外周组织中的浸润,起到了胰腺及远隔器官的保护作用。通过本研究,我们发现CD4+T淋巴细胞在SAP早期的炎症免疫反应中发挥重要作用。SAP早期的胰腺损伤与CD4+T淋巴细胞在外周组织中浸润之间具有良好的相关性;早期抑制SAP小鼠体内的CD4+T淋巴细胞在外周组织中的浸润,可以明显减轻机体的炎症反应,降低胰腺及远隔器官的损伤。