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tRNA(transfer ribonucleic acid)3’端加工成熟过程，是指剪切掉tRNA前体3’端的多余碱基序列以及在其末端添加CCA的过程。只有加工成熟后的并带有3’CCA末端的tRNA才能进行氨基酰化，执行其在蛋白合成过程中的功能。真核生物、古生菌和一些细菌的tRNA基因不编码3’末端CCA，其CCA需要在tRNA3’末端加工成熟后再添加上去，这类tRNA的3’末端的加工成熟需要核酸内切酶tRNase Z参与。 粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyce pombe中含有两种tRNase Z基因：sptrz1+(SPAC1D4.10)和sptrz2+(SPBC3D6.03c)，它们编码的蛋白分别定位于细胞核和线粒体中。本实验组已经证实两种tRNasez都是必需基因。我们已经完成了对sptrz1+的功能的相关研究，本实验的主要内容是得到一株sptrz2+的温度敏感型突变菌株，并利用该菌株进行SpTrz2p功能的相关研究。 据冷泉港实验室Danielle V.报道sptrz2-A623V的突变会使菌株产生温度敏感的表型。本实验中把sptrz2-A623V突变引入到遗传背景比较清楚的菌株S.pombeyAS56中的，得到具有温度敏感型的菌株tsD。根据对tsD中sptrz2-A623V的基因型进行测序鉴定以及带有sptrz2+的外源质粒限制性温度下救活实验的结果，因此确认tsD即为sptrz2+的温度敏感型菌株，可以用于对SpTrz2p相关功能的进一步研究。 本课题组也对温敏菌株SpTrz2p的C端进行加标签实验，选择了三种标签：HA、3HA、GFP，从而可以利用western技术跟踪测定细胞内SpTrz2p的表达量。得出温度敏感型菌株产生的原因，但是在实验过程中发现标签对Sptrz2p功能有影响：HA、3HA对蛋白功能的影响较GFP严重。成功的给野生型S.pombeyAS56的Sptrz2p加上了GFP标签，但无法给温度敏感型菌株加上标签，进而采用重组蛋白的方法制备Sptrz2p的抗体。