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研究背景类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以累及周围关节为主的系统性自身免疫病。临床表现为受累关节肿痛,该病若不经及时、规范治疗,病情会进行性发展而导致关节软骨与骨质破坏,进而造成关节畸形与功能丧失,严重地影响患者生活质量。RA的发病涉及多种因素,大量研究表明遗传因素在RA的发生、发展中起重要作用,该病的遗传度高达60%左右。近年来,从人类基因组水平探索基因单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)位点与疾病遗传易感性之间联系的全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)极大地丰富了我们对复杂疾病遗传易感因素的认识。迄今,已有多项GWAS发现并证实了几十个与RA遗传易感性相关的遗传易感区域/位点,但这些GWAS大多数是在欧美人群中开展的,尚未见我国RA的GWAS结果报道。一项在西班牙人群中开展的GWAS发现KLF12基因rs1324913位点与RA遗传易感性相关,此前,在英国人群中开展的GWAS发现KLF12基因rs1887346位点与RA遗传易感性相关,表明KLF12是RA的遗传易感基因。一项在日本人群中开展的GWAS发现AIRE基因的两个SNP位点(rs2075876和rs760426)与RA的遗传易感性相关,并且rs2075876位点与AIRE基因的转录水平相关。系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)与RA同属系统性自身免疫病,由于RA与SLE临床表型相似、家族聚集,表明RA与SLE可能存在共同的遗传背景,大量疾病间的遗传易感性验证研究也证实了RA与SLE确实具备相同的遗传易感因素。一项在日本人群中开展的GWAS和多阶段验证研究发现AFF1 rs340630与SLE遗传易感性相关且该位点风险等位基因A与AFF1基因转录水平上调相关。此前,与AFF1基因同属一个基因家族的AFF3基因启动子区域的rs10865035位点被报道与RA遗传易感性相关,随后一些研究也发现AFF3基因与RA遗传易感性相关。一项在中国汉族人群开展的GWAS发现ETS-1rs6590330位点与SLE遗传易感性相关,另一项在亚洲人群中开展的GWAS发现ETS-1 rs1128334位点与SLE遗传易感性相关,该位点与rs6590330位点高度连锁且位于3’-非翻译区(untranslated region,UTR),其风险等位基因A与正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中ETS1基因的转录水平下调有关,表明ETS-1 rs1128334位点是一个功能性SNP位点。目的鉴于种族间的遗传异质性、RA与SLE具备共同的遗传易感因素,且尚未见国内有研究报道KLF12 rs1324913、KLF12 rs1887346、AIRE rs2075876、AIRE rs760426、AFF1 rs340630、AFF3 rs10865035及ETS-1 rs1128334位点与中国人群RA遗传易感性之间的关系,故本研究拟采用病例对照研究,通过检测RA患者与对照中上述SNP位点,分析各SNP位点基因型频率分布与等位基因频率分布在RA病例组与对照组间的差异,并进一步分析各位点风险等位基因在不同遗传模型(显性遗传模型与隐性遗传模型)下与RA遗传易感性之间的关系,以期为我国人群RA遗传易感性研究提供本底资料,并为进一步开展相关分子致病机制研究提供科学依据。方法本课题采用病例对照研究设计,RA病例为安徽省六安市人民医院风湿免疫科的门诊RA患者,所有病例均符合美国风湿病协会(American College of Rheumatology,ACR)1987年修订的RA分类标准。对照为六安市人民医院骨科门诊因外伤就诊者。研究对象知情同意后,按照性别与年龄信息的一般人口学特征,收集RA患者的资料,同时抽取外周静脉血5ml,提取研究对象基因组DNA。运用专业SNa Pshot SNP技术检测基因多态位点。采用Excel 2003软件录入资料。运用STATA12.0软件评估对照组中各SNP位点的基因型频率分布是否符合哈迪-温伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium,HWE)。使用SPSS 11.0软件进行t检验、卡方检验和logistic回归分析。关联强度以比值比(odds ratio,OR)及其95%置信区间(confidence interval,CI)表示。以α=0.05为一类检验水准,采用Bonferroni法在多重比较时对检验水准进行矫正,因本次研究共有7个SNP位点,所以矫正后的检验水准为0.05/7=7.14×10-3。结果(1)研究对象一般情况:本研究共纳入RA患者232例,对照313例。RA患者中男性45例,女性187例,年龄最小者14岁,最大者80岁,平均年龄为(48.69±14.18)岁。RA患者中RF阳性154例,RF阴性78例;CCP阳性228例,CCP阴性4例。对照组中男性197例,女性116例,年龄最小者2岁,最大者91岁,平均年龄为(47.02±16.34)岁。RA病例组与对照组的性别构成有统计学差异(χ2=102.33,P<0.01),而平均年龄无统计学差异(t=1.28,P=0.20);(2)HWE检验:7个基因多态性位点在对照组中的基因型频率分布均符合HWE(KLF12 rs1324913位点:c2=0.34,P=0.56;KLF12 rs1887346位点:c2=2.67,P=0.10;AIRE rs2075876位点:c2=0.11,P=0.74;AIRE rs760426位点:c2=0.02,P=0.89;AFF1 rs340630位点:c2=4.20,P=0.04;AFF3rs10865035位点:c2=4.76,P=0.03;EST-1 rs1128334位点:c2=2.26×10-3,P=0.95);(3)各基因多态性位点与RA遗传易感性之间的关联研究结果:考虑到RA病例组与对照组间性别构成存在统计学差异,我们在分析RA病例组与对照组间的基因型频率分布差异、风险等位基因在不同遗传模型(隐性遗传模型与显性遗传模型)下与RA遗传易感性的关联情况时在性别上进行了矫正,研究结果显示AIRE rs2075876位点的基因型频率分布(χ2=8.22,P=0.02)与等位基因频率分布(A vs.G:χ2=5.30,P=0.02,OR=1.33,95%CI 1.04-1.69)在RA病例组与对照组间均存在统计学差异,且该位点风险等位基因在显性遗传模型下与RA遗传易感性之间存在统计学关联(A/A+G/A vs.G/G:χ2=7.24,P=7.15×10-3,OR=1.78,95%CI 1.17-2.70);AIRE rs760426位点的基因型频率分布在RA病例组与对照组间存在统计学差异(χ2=6.46,P=0.04),且该位点风险等位基因G在隐性遗传模型下与RA遗传易感性之间存在统计学关联(G/G vs.G/A+A/A:χ2=5.38,P=0.02,OR=1.73,95%CI 1.09-2.76)。然而,经Bofferroni法矫正后仅有AIRE rs2075876位点A等位基因在显性遗传模型下与RA遗传易感性之间的关联结果经Bonferroni法矫正后边缘显著。未发现其余5个基因多态性位点与RA遗传易感性相关。结论本研究发现AIRE rs2075876位点、AIRE rs760426位点与我国人群RA遗传易感性相关,但经Bofferroni法矫正后仅有AIRE rs2075876位点A等位基因在显性遗传模型下与RA遗传易感性之间的关联结果经Bonferroni法矫正后边缘显著。AIRE基因可能是我国人群RA的一个遗传易感基因,将来有必要采用大样本研究来证实AIRE是否确实是我国人群RA的遗传易感基因。本研究尚未发现KLF12rs1324913、KLF12 rs1887346、AFF1 rs340630、AFF3 rs10865035及ETS-1 rs1128334位点与我国人群RA遗传易感性相关,这些基因是否与我国人群RA遗传易感性相关有待将来采用大样本的精细定位研究进行验证。