论文部分内容阅读
近年来胃肠激素的生长因子样效应或生长抑制效应逐渐受到重视。蛙皮素是14个氨基酸残基组成的具有生长因子样作用的胃肠肽,对小细胞肺癌具有自分泌调节作用。为了了解胃癌细胞的生长调控,用不同的细胞模型观察蛙皮素的作用,显得尤为重要。本研究的目的在于确证蛙皮素对胃癌细胞和正常胃粘膜细胞的促生长及自分泌调节作用并对其作用机制进行研究,所用细胞株分别为SGC7901和人胃粘膜上皮永生细胞株GES-1。实验方法:①以3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)摄取和hiazolyl blue(MTT)作为细胞生长指标,研究蛙皮素、蛙皮素拮抗剂和蛋白激酶C(PKC)拮抗剂对SGC7901和GES-1细胞生长的影响。②利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和Southern印迹杂交观察两株细胞在mRNA水平的表达,利用化学交联和增强化学发光剂(ECL)自显影法以及细胞化学方法观察蛋白水平的GRP-R表达情况。③研究不同浓度蛙皮素及拮抗剂对SGC 7901细胞IP3产生的影响,观察蛙皮素及拮抗剂对GES-1细胞IP3产生和PKC活性的影响。④在无血清培养条件下观察蛙皮素拮抗剂对SGC7901细胞生长的影响。⑤利用RT-PCR/Southern杂交观察蛙皮素对GES-1细胞蛙皮素受体mRNA表达的影响,以确定是否存在自分泌调节机制。结果:①蛙皮素对此两株细胞具有促生长作用,此促生长作用可被其拮抗剂(受体特异性)所拮抗。蛙皮素对人胃癌细胞SGC7901有明显的促生长作用(3H-TdR摄取率3916±324 vs 2241±119cpm/孔,BOM 10-8M vs对照,n=3,p<0.01)。此促生长作用在48小时最为明显。蛙皮素对GES-1也有明显的促生长作用(OD492 1.243±0.2 vs 0.71±0.03 BOM 10-8M vs对照,n=3,p<0.01)。蛙皮素拮抗剂[D-Arg1,D-Phe5。D-Trp7,8,Leu11]Substance P能拮抗蛙皮素对SGC7901的促生长作用(3H-TdR摄取率2365±219 vs 3428±115cpm/孔,