降解纤维素产乙醇厌氧菌群的筛选鉴定及重组β-半乳糖苷酶的性质分析

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:psh860525
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
随着石油、天然气等不可生资源的逐渐枯竭,以可再生纤维素制取乙醇逐渐成为当今世界研究的热点之一。利用纤维素生产乙醇的瓶颈是缺乏高效的降解纤维素产乙醇菌株以及成本偏高。传统的采用化学工艺降解纤维素,反应条件苛刻,对环境污染严重。因此筛选和改造发酵纤维素原料产乙醇的微生物是纤维素生物转化燃料乙醇的关键。本研究从永泰70℃温泉中富集优化出一个能降解纤维素的厌氧嗜热菌群YTY-70,通过条件优化测的该菌群最适生长温度为70℃,最适生长pH值为7.0,以滤纸为碳源的培养基中,该菌群的生长密度在72小时后达到最大值。在菌群生长条件优化时,本次实验以滤纸作为培养基的碳源,并在测OD值时先用快速滤纸将菌液过滤,尽可能的除去影响OD值的杂质。确定菌群生长的最适条件后,在最适条件下分别以CMC、滤纸、甘蔗渣、平菇筒为碳源,培养一周后用气相色谱测量发酵液中的乙醇,测的乙醇的含量分别为:0.124mL/L,0.127mL/L,0.122mL/L,0.124mL/L。提取菌群的总DNA,用16S引物扩增其保守序列,将片段连接到PMD-18T载体,转化到大肠杆菌中,经验证后挑去阳性克隆子外送检测。检测结果显示,该菌群中绝大部分菌属于Caldicellulosiruptor菌属。该菌属的细菌不但可以降解纤维素产乙醇,还可以产氢气、乙酸、高温纤维素酶、半乳糖苷酶等,具有良好的研究与应用价值。嗜热菌体内存在着独特的耐高温代谢途径和耐高温酶,一些来自嗜热菌的热稳定性的酶也已经相继被分离出来。但嗜热菌的培育条件较为严格、生长速度较慢,酶系复杂且产酶水平低,对乙酸等副产物的耐受性较差,从而阻碍了嗜热菌在工业生产中的大规模应用。本研究以分离自永泰70温泉的嗜热厌氧菌群YTY-70总基因组为模板,经测序对比后,设计β-半乳糖苷酶基因的引物,成功克隆出了热稳定β-半乳糖苷酶的基因。将基因与pGEX—4T-2连接,转化大肠杆菌构建了重组菌,通过培养和IPTG诱导,β-半乳糖苷酶获得了高效表达。用Glutathione SepHarose4B亲和纯化GST—β-半乳糖苷酶融合蛋白,获得大约2.19mg的GST—β-半乳糖苷酶融合蛋白并对其酶学性质进行了研究。研究表明,该重组酶的最适反应温度为75℃,最适反应pH值为7.0,反应温度范围非常广泛,在50-90℃均能发挥良好的酶活力。金属离子Ba2+、K+、Na+、Mg2+、Zn2及EDTA对该重组酶的酶活有轻微的抑制作用(1.4%-4.4%)。Fe2+、Ca2+对该重组酶的酶活有不同程度的促进作用。在最适反应条件下,该酶的比酶活高达260U/mg。通过分析其编码的氨基酸序列可知,该酶属于糖苷水解酶类第一家族。通过与其他菌属耐热β-半乳糖苷酶比较发现,该酶与其他菌属的β-半乳糖苷酶同源性较低。
其他文献
煤在直接液化过程中会产生大量液化残渣,残渣的清洁转化利用可提高煤炭资源的利用效率。本文以神华煤液化残渣为原料,采用TG-FTIR联用技术,考察了催化剂种类、催化剂添加量、
新课程标准要求“语文教学应在师生平等对话的过程中进行”。在教学过程中,教师、学生、文本三者之间构成了一个独特的教学场,发挥三者的最佳场力组合,营造和谐的语文教学氛
废弃废纸纤维含有丰富的纤维素,其在加压热水(Hot Compressed Water,HCW)中转化生产5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethyl furfural,5-HMF)等其它具有高附加值的基础平台化合物,不仅
集体备课以其独有的优势成为一种蕴含无限潜力、有价值的备课组织形式。但是由于集体备课在实际操作过程中存在备课过程流于形式、偷工减料,备课管理刚性有余、柔性不足,备课
如何治理污水是水体循环中的一个重大课题,本文所研究的高浓度香料有机废水正是污水治理中的一个较难解决的对象。湿式催化氧化法一直以来都是处理难生物降解的有机废水的有
<正>制造企业服务化中服务供应商起着重要的作用,服务供应商直接决定着服务的质量以及产品服务集成的效果,制造企业需要妥善选择服务供应商服务经济是近些年崛起的新的经济形
当前学校教育中有两种值得注意的现象:一是不敢使用惩罚;二是不会使用惩罚,滥用惩罚。本文结合几位著名教育家的思想,从理论和实践的角度对此进行了全面的剖析,并提出了一些
在各种促进胎儿感官发育的胎教中,音乐胎教是一种从孕早期就可以进行,效果明显的胎教形式。音乐胎教不仅可以带来情绪上的稳定,对胎儿的先天智能启发和性格养成也有积极影响
<正> 一、前言城村汉城遗址位于福建崇安县南部的城村西南的丘陵上(图一),距崇安县城约35公里,是1958年间南平专区文物普查队发现的。当时在这里发现有大量的绳纹和印有文字
生态语言学视域下的英美文学教育研究,将生态语言学理论创造性地运用于高校英美文学教育研究领域,全面审视英美文学教育生态环境,将教师、学生、文学及环境作为英美文学教育