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大肠杆菌0157：H7和志贺氏菌是两种极易引起人类食物中毒的肠道致病菌，本文应用特异性IgY作为抗体，系统研究了3种ELISA方法检测大肠杆菌0157：H7和志贺氏菌，主要结果如下：
(1)两种特异性IgY抗体的纯化
通过水稀释法提取抗大肠杆菌0157：H7IgY抗体和抗志贺氏菌IgY抗体，经盐析和脱盐等步骤进行抗体纯化，10mg／mL纯化后抗大肠杆菌0157：H7IgY抗体和抗志贺氏菌IgY抗体效价均为l：320。
(2)建立3种ELISA方法检测大肠杆菌0157：H7
确定3种ELISA方法检测大肠杆菌0157：H7的工作条件、检出限及特异性，其中间接ELISA检测大肠杆菌0157：H7的IgY抗体工作浓度为0．5mg/mL，对大肠杆菌0157：H7纯培养菌液检出限为106CFU／mL~直接ELISA检测大肠杆菌0157：H7的酶标IgY抗体工作浓度为1：10，对大肠杆菌0157：H7纯培养菌液检出限为106CFU／mL；以兔抗大肠杆菌0157：H7IgG抗体稀释3200倍作为捕获抗体，抗大肠杆菌0157：H7IgY抗体作为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法检测大肠杆菌0157：H7，捕获抗体在37℃包被2h、不封闭、抗原与捕获抗体于37℃结合2h、检测抗体浓度为0．25mg／mL、与抗原37℃结合1h的检测条件下，双抗夹心ELISA对大肠杆菌0157：H7纯培养菌液检出限为105CFU／mL。以上3种方法均有特异性。
(3)建立3种ELISA方法检测志贺氏菌
确定3种ELISA方法检测志贺氏菌的工作条件、检出限及特异性，其中间接ELISA检测志贺氏菌的IgY抗体工作浓度为0．25mg／mL，对志贺氏菌纯培养菌液检出限为106CFU／mL；直接ELISA检测志贺氏菌的酶标IgY抗体工作浓度为l：10，对志贺氏菌纯培养菌液检出限为106CFU／mL；以兔抗志贺氏菌IgG抗体稀释3200倍作为捕获抗体，抗志贺氏菌IgY抗体作为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法检测志贺氏菌，捕获抗体在4℃包被过夜、不封闭、抗原与捕获抗体于37℃结合1h、检测抗体浓度为0．25mg／mL、与抗原在37℃结合1h的检测条件下，双抗夹心ELISA对志贺氏菌纯培养菌液检出限为105CFU／mL。以匕3种方法均有特异件。
(4)双抗夹心ELISA在检测几种食品中大肠杆菌0157：H7和志贺氏菌的应用
通过对间接、直接和双抗夹心ELISA3种方法检测大肠杆菌0157：H7和志贺氏菌的研究表明，双抗夹心ELISA是最佳检测方法。接种大肠杆菌0157：H7的巴氏消毒牛奶、生牛肉和卤牛肉在EC增菌液中经41℃、200r／min选择性增菌6～16h后双抗夹心ELISA检测结果如下：O．1~1CFU／mL接种量时，巴氏消毒牛奶在增菌10h后经检测呈阳性反应，其余两个样品在12h经检测呈阳性反应；1～10CFU／mL接种量的巴氏消毒牛奶和生牛肉在增菌8h后经检测呈阳性反应，卤牛肉在增菌10h后经检测呈阳性反应。接种志贺氏菌的自来水和即食豆干在GN增菌液中经过37℃、150r／rain选择性增菌6～16h后双抗夹心ELISA检测表明，0．1～1CFU／mL和1～10CFU／mL接种量的样品分别在增菌13h和¨h后经检测呈阳性反应。