论文部分内容阅读
目的：探讨燃煤砷暴露致人群全血人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶（hOGG1）基因的表观遗传学改变，及基因多态性与靶基因转录调控，和氧化损伤关系在肝病变过程中的作用，为砷中毒分子机制研究提供科学依据。 方法：以贵州省兴仁县燃煤型砷中毒病区207例砷暴露者为砷暴露组（包括病区非病人46例、无明显肝病组49例、轻度肝病组65例、重度肝病组47例），非砷暴露村大果朵村选择64例健康村民作为对照组。知情同意情况下，采集观察对象的全血。①应用甲基化特异性PCR（MSP）法检测其hOGG1基因甲基化水平，以聚合酶链式反应一限制性片段长度多态性分析(PCR—RFLP)法检测hOGG1Ser326Cys基因的多态性，以实施荧光定量PCR（RT-PCR）法检测hOGG1、APE1、XRCC1 mRNA转录表达情况，化学法检测血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力、丙二醛（MDA）含量，尿8_羟基脱氧鸟嘌呤（8-OHdG）含量；②依据甲基化状态将上述观察对象分为hOGG1基因甲基化组（34例）和hOGG1基因非甲基化组（237例），分析hOGG1基因甲基化及氧化应激与砷致肝损伤的关系。③依据hOGG1基因多肽性检测结果将观察对象分为Ser/Ser组（野生型181例）和Ser/Cys＋Cys/Cys组（突变型90例），分析hOGG1基因多态性及基因甲基化与砷致肝损伤的关系。 结果：①病区非病人、无明显肝病、轻度、中重度肝病组人群全血hOGG1基因甲基化阳性率分4.35、14.28、18.46、25.53％，显著高于对照组1.56%（P<0.05），且随着砷中毒程度的加重而增加（P<0.05）；②肝损伤组与非肝损伤组hOGG1Ser326 Cys多肽位点Ser/Ser、Ser/Cys+Cys/Cys基因型分布构成分别为：54.60、45.40、69.77、30.23%，差异有统计学意义（P＜0.05）；③Ser/Ser组和Ser/Cys＋Cys/Cys组hOGG1基因甲基化阳性率分别为6.62%和24.44%，差异具有统计学意义（P＜0.05）；其中病区非病人病、无明显肝病、轻度、中重度肝病人群中，基因型不同组hOGG1基因甲基化阳性率差异有统计学意义（P<0.05）；⑤甲基化组hOGG1、APE1、XRCC1 mRNA转录表达显著低于非甲基化，差异有统计学意义（P＜0.05）；⑥Ser/Ser组和Ser/Cys＋Cys/Cys组hOGG1、APE1及XRCC1 mRNA转录水平无显著性差异（P＞0.05）；⑦轻度和中重度肝病组hOGG1、APE1、XRCC1 mRNA转录表达明显低于对照组（P＜0.05）；⑧甲基化组的血清SOD﹝（85±25）kU/L﹞、GSH-Px﹝（70±26） kU/L﹞活力、尿8-OHdG含量﹝（22.5±6.8）μg/L﹞明显低于非甲基化组﹝(118±41)kU/L、(171±56) kU/L，（28±6.5）μg/L）﹞，甲基化组与非甲基化组血清MDA含量无显著性差异；⑨轻度、中重度肝损伤，甲基化组的血清SOD、GSH-Px水平明显低于非甲基化组（P＜0.05），尿8-OHdG水平明显升高（P＜0.05），其余组间无差异（P＞0.05）。 结论：①燃煤砷导hOGG1基因高甲基化，进而抑制其mRNA转录表达，在砷致肝脏病变过程中起重要作用。②hOGG1mRNA转录水平降低，可能影响其DNA损伤识别功能，进而抑制APE1、XRCC1mRNA转录表达。③未发现hOGG1基因多态性影响其mRNA转录表达，故其不是砷中毒肝损伤的主要原因。④本研究发现，砷所致氧化与抗氧化失衡，和hOGG1高甲基化所致的转录表达异常引起的酶学改变，是砷中毒肝损伤的主要原因。