【摘 要】
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目的:筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,以获取日本血吸虫表达序列标签(Expressed Sequences Tags,EST)和新基因,扩充日本血吸虫基因组的研究信息,寻找和研究血吸虫新基因的结构和
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目的:筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,以获取日本血吸虫表达序列标签(Expressed Sequences Tags,EST)和新基因,扩充日本血吸虫基因组的研究信息,寻找和研究血吸虫新基因的结构和功能,为日本血吸虫疫苗候选分子筛选、诊断试剂开发和药物阻断研究提供实验基础和理论依据.方法:1)从已构建的日本血吸虫成虫cDNA文库中随机挑取重组阳性克隆进行测序,对获取的EST进行编辑和分析后,将其中的新EST登录GenBank以获得GenBank登录号;2)对已获得的部分感兴趣的EST序列进行步移法测序以获取全长cDNA,并对其进行生物信息学分析后登录GenBank以获得GenBank基因登录号和蛋白登录号;3)用PRIMER5.0引物设计软件自行设计引物,PCR扩增SjBBC1基因,将PCR产物纯化后与pUCm-T载体连接,经蓝白筛选、双酶切分析和PCR鉴定后,亚克隆入pWR450-1和pQE30原核表达载体及pcDNA3.1真核表达载体中.对原核表达产物采用SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定.结论:1)获取了71条日本血吸虫新的EST并成功登录GenBank获得登录号.2)获取了16个日本血吸虫新基因,成功登录GenBank获得基因登录号和蛋白登录号.3)成功构建了原核表达载体:pWR450-1/SjBBC1和pQE30/SjBBC1并于大肠杆菌表达,为相应抗原的制备提供实验基础.4)成功构建了pcDNA3.1/SjBBC1真核表达载体.
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