目的:1建立单次不同剂量致兔放射性肝损伤的动物模型,观察放射性肝损伤的病理形态学变化及与剂量效应关系,为肝癌的放射治疗提供实验依据。2观察放射性肝损伤肝组织细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源生长因子(PDGF)、结缔组织生长因子(CTGF)定位和表达情况,初步探讨细胞因子与放射性肝损伤的关系,以及影响放射性肝损伤的发生因素,进一步揭示放射性肝损伤的发病机理,为我们找到一条预防、治疗放射性肝损伤的新途径提供部分实验依据。方法:1兔半肝放射性损伤动物模型的制备:实验用兔随机分为正常对照组(A),照射组(B、C、D)共四组(每组5只)。用速眠新和氯胺酮1:1配比混合肌肉注射麻醉后,兔仰卧固定于木制兔台,兔台固定于治疗床上的负压真空垫内,行CT定位扫描,扫描范围从膈顶至肝脏下缘,并将CT定位扫描信息传输至TPS工作站中,以胆囊为界勾画右半肝为放疗靶区,55%等剂量曲线为处方曲线,采用全身伽玛刀2.5准直器单次照射。B、C、D三组分别给予10Gy、15Gy和20Gy放射剂量。2放射性肝损伤病理形态学及细胞因子表达观察:实验3个月末深度麻醉动物后,分别于放疗耙区中心(高剂量区)、放疗耙区边缘(低剂量区)、左半肝外侧叶(未照射区)切取3块1cm×1cm×1cm大小的肝组织。获取标本行HE染色,Masson染色比较观察各组肝脏组织病理形态学变化。免疫组化法观察TNF-α、TGF-β1、PDGF、CTGF定位和表达情况。3统计数据用SPSS13.0软件分析。结果:1一般情况观察:实验过程中,放疗组的大白兔毛色晦暗,精神萎靡,反应迟钝,进食进水减少,易受惊,体质量增长缓慢。2兔肝放射性损伤病理形态学观察:肉眼观:照射组肝脏体积缩小,边缘变钝,质地较硬,颜色变浅,表面及切面呈灰黄色,膈面近中心处为著,表面粗糙触之有结节感,可见细颗粒状结节。照射剂量越高,上述改变越明显。肝脏各叶间肉眼观无显著差别。HE染色及Masson染色光镜观:照射组可见中央静脉及肝窦淤血,可见静脉闭塞征(venous occlusive disease,VOD),肝细胞坏死,炎细胞浸润,小胆管增生,胶原纤维于汇管区、肝窦及中央静脉周围增多沉积并向肝小叶内肝索间及肝小叶间延伸。不同剂量组肝脏相同取材区随放疗剂量增大而显著;相同剂量组肝脏不同取材区其改变随未照射区、低剂量区、高剂量区受照剂量的增大而呈加重趋势。3细胞因子表达情况:照射后肝中细胞因子TNF-α、TGF-β1、PDGF、CTGF均显著表达于肝脏纤维间隔,中央静脉及汇管区周围细胞的胞浆中。随着照射剂量的增加,不同放射剂量组肝脏相同取材区细胞因子的表达呈进行性的增加,差异具有显著性(P<0.05),且与对照组比较有显著性差异(P<0.05);相同放射剂量组肝脏不同取材区随未照射区、低剂量区、高剂量区受照剂量的增加进行性增加,差异具有显著性(P<0.05),且与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。4组织病理学相关分析:总剂量与细胞因子的表达存在显著的正相关(r=0.899,0.958,0.959,0.968,P<0.01),与胶原纤维含量(晚期放射性肝纤维化程度)也存在显著的正相关(r=0.967,P<0.01)。即总剂量越高,细胞因子表达越高,肝纤维化程度越高。细胞因子TNF-α、TGF-β1、PDGF、CTGF之间均存在显著的相关性(r=0.810,0.863,0.866,0.821,0.899,0.804,P< 0.01)。细胞因子的表达与胶原纤维含量(晚期放射性肝纤维化程度)呈显著的正相关(r=0.892,0.848,0.942,0.764,P<0.01)。结论:1放射性肝损伤晚期其主要病理表现特征为:肝静脉闭塞征(VOD)即中央小静脉闭塞性病变和肝纤维化。随放疗剂量增加,肝静脉闭塞、肝脏纤维化及肝细胞、胆管损伤逐渐加重。提示肝脏受照射剂量是导致放射性肝损伤发生的重要因素。2照射后肝组织中可见广泛的TNF-α、TGF-β1、PDGF、CTGF表达,且随着放疗剂量的增加细胞因子阳性表达进行性增强,肝损伤的病理改变进行性加重;总剂量与细胞因子和肝纤维化程度显著相关,提示TNF-α、TGF-β1、PDGF、CTGF在促进肝损伤的形成中可能起了重要的作用;剂量因素与放射性肝损伤发生的关系密切;放射性肝损伤的发生是多因素影响和作用的结果。3 TNF-α、TGF-β1、PDGF、CTGF表达分布相似,表达量具有相关性,且与病理上肝纤维化程度相平行,提示晚期放射性肝纤维化的形成是一个有多种细胞因子参与的复杂过程,细胞因子在肝纤维化的发生过程中彼此密切关联,可能存在级联反应,协同促进放射性肝纤维化进行性进展。4照射野外发现细胞因子表达增高,与对照组差异有显著性,因此认为放射性肝损伤在一定时期可能并非局限于受照组织局部,局部放射损伤将逐渐诱导照射野外放射性肝损伤的发生。