具有抑制单核细胞增生李斯特菌的乳酸菌的筛选及抑菌性质的研究

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单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)能引起严重的食源性疾病。该菌能在低至4℃的温度下生存和繁殖,可引起脑膜炎、败血症和流产,发病率虽不高,但死亡率可达20%-50%。控制单核细胞增生李斯特菌在食品中的污染非常重要。乳酸菌可通过产生有机酸、双乙酰、过氧化氢和细菌素等多种代谢产物,抑制食品中的腐败菌和病原菌,在体内,可以通过占位作用排除致病菌,其分泌代谢产物抑制致病菌或激活机体免疫清除致病菌。通过体外抑菌性质的筛选,将乳酸菌或其代谢产物应用于食品体系中,为控制单核增生李斯特菌提供了一种基于生物拮抗的控制方法,对于减少动物疾病发生,提高相关产品的安全性具有重要意义。本研究从传统发酵食品、健康婴儿粪便中分离出乳酸菌菌株285株,利用抑菌圈试验得到发酵上清具有拮抗性质的乳酸菌7株,通过细胞模型筛选,考察菌株自身对于肠上皮细胞的粘附性能、抑制单核细胞增生李斯特菌粘附和侵入HT-29细胞的能力,最终筛选出1株在体外具有良好拮抗单核细胞增生李斯特菌功能的乳酸菌,经过16s rDNA鉴定,命名为乳酸片球菌P9。其抑菌圈直径达23.8±2.4mm,自身粘附细胞能力能力有限,但对病原菌的抑制粘附率达48.2%、侵入抑制率达35.9%。对乳酸片球菌P9的发酵上清中的抑菌成分进行分析,结果表明,其对热稳定(121℃,20min处理后仍具有一定抑菌活性)、对pH在一定范围内稳定(2.0-10.0),但对蛋白酶敏感,推测其上清液中的主要抑菌物质为蛋白质类。此抑菌物质随菌株生长累积。其抑菌谱显示,除了对单核细胞增生李斯特菌具有拮抗作用,还对志贺氏菌显示抑菌活性,但对于发酵菌株,嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌均没有抑制作用。在共培养体系中,,单核细胞增生李斯特菌的活菌数下降了一个数量级,说明该菌能够有效抑制单核细胞增生李斯特菌的生长活性。对乳酸片球菌P9菌株的部分性质进行测定,发现其具有较强的耐胆盐特性(在胆盐浓度0.3%条件下存活率高),能在pH3.0的人工胃液中存活,药敏性实验中,结果显示其对氯霉素等抗生素敏感,对万古霉素等抗生素耐受。将乳酸片球菌P9应用于酸奶体系中,发现其可以存活,发酵结束储藏7天后,活菌数仍可达到6.5±0.3×10~6cfu/mL。对酸奶的性质具有一定影响,使得酸奶粘度、持水力下降,酸度上升,但对后酸化的影响并不严重。同时,在此食品体系中,表现具有拮抗单核细胞增生李斯特菌活性,在致病菌高接种量的条件下,7天内控制病原菌降至1000cfu/mL。综上可见,乳酸片球菌P9在体外具有明显的抑制单核细胞增生李斯特菌的性质,并可在细胞模型中抑制此病原菌对HT-29的粘附和侵入,在酸奶体系中表现出抑菌性质,具有应用于开发基于生物拮抗功能的产品的潜能。
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