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［目的］结外NK/T细胞淋巴瘤（ENKTL）是常见的侵袭性恶性肿瘤之一,约占我国淋巴瘤的6.02%,但发病原因目前尚未明确。根据肿瘤患者的染色体核型、基因拷贝数和基因表达谱结果显示:部分抑癌基因参与了NK/T细胞淋巴瘤的发生和发展。本研究在前期构建的NKp46-iCre转基因小鼠基础上,探究抑癌基因Foxo1、PTEN、SHP-1及染色体13q14在小鼠NK细胞淋巴瘤的发生过程中是否发挥关键作用。该研究主要分为以下三个部分:第一部分:抑癌基因Foxo1和PTEN在小鼠NK细胞淋巴瘤发生中的作用探索［方法］1.利用NKp46-iCre小鼠与ROSA26-YFPloxP/stop/loxP[ROSA26-YFP（+/+）]小鼠交配,得到NKp46-iCre;ROSA26-YFP（+/-）小鼠,利用流式细胞术检测各组织器官中YFP阳性细胞的百分比及脾脏中各淋巴细胞系中YFP阳性细胞的百分比;2.利用NKp46-iCre小鼠分别与Foxo1fl/fl、PTENfl/fl小鼠交配,得到NKp46-iCre;Foxo1fl/flPTENfl/fl(Foxo1△NKPTEN△NK)小鼠,即NK细胞内特异性敲除Foxo1和PTEN的小鼠,连续观察小鼠的生长发育和成瘤情况;利用流式细胞术,检测NK细胞内Foxo1和PTEN双基因缺失后小鼠主要淋巴器官内的NK细胞的比例变化;3.利用B16F10恶性黑色素瘤移植瘤小鼠模型,观察小鼠NK细胞内Foxo1和PTEN双基因缺失后对NK细胞的肿瘤免疫监视功能的影响。［结果］1.与对照组NKp46-iCre;ROSA26-YFP（-/-）小鼠相比,NKp46-iCre;ROSA26-YFP（+/-）小鼠的外周血、淋巴结、骨髓、脾脏中YFP表达的阳性细胞的百分比明显升高[（BL:8.03%±1.64%vs 0.01%±0.008%）、（LN:0.26%±0.03%vs 0.01%±0.001%）、（BM:1.37%±0.003%vs 0.003%±0.001%）（SP:2.59%±0.67%vs 0.029%±0.013%）],（n=5,P<0.05）;两组小鼠非免疫器官心脏中YFP均无明显表达,差别没有统计学意义（Heart:0.009%±0.007%vs0.023%±0.01%）（n=5,P﹥0.05）;流式检测NKp46-iCre;YFP（+/-）小鼠脾脏中NK细胞、T细胞和B细胞的YFP阳性细胞的百分比为81.33%±1.43%、0.19%±0.08%、0.11%±0.009%,NK细胞中YFP阳性细胞的百分比明显高于T细胞和B细胞。2.成功建立了在NK细胞内Foxo1和PTEN双基因同时缺失的小鼠模型,连续观察小鼠46周,与对照组小鼠(Foxo1fl/flPTENfl/fl)相比,Foxo1△NKPTEN△NK小鼠生长发育未见明显异常,未形成自发性肿瘤;Foxo1△NKPTEN△NK小鼠的外周血、淋巴结、骨髓、脾脏中NK细胞的比例无明显变化（BL:4.76%±0.46%vs4.17%±0.64%）（P﹥0.05,n=8）;（LN:0.50%±0.10%vs 0.85%±0.20%）（P﹥0.05,n=8）;（BM:1.13%±0.23%vs 1.31%±0.10%）（P﹥0.05,n=8）;（SP:4.41%±0.65%vs 3.5%±0.24%）（P﹥0.05,n=8）。3.B16F10恶性黑色素瘤移植瘤小鼠模型建立后,与对照组(Foxo1fl/flPTENfl/fl)相比,Foxo1△NKPTEN△NK小鼠的生存时间无统计学差异（P﹥0.05,n=13）。［小结］NKp46-iCre介导的YFP报告基因标记小鼠体内的NK细胞具有特异性,抑癌基因Foxo1、PTEN在小鼠NK细胞淋巴瘤发生过程中可能不具备关键作用,同时缺失后对体内NK细胞的肿瘤免疫监视功能影响不大。第二部分:抑癌基因Foxo1和SHP-1在小鼠NK细胞淋巴瘤发生中的作用探索［方法］1.利用NKp46-iCre小鼠分别与Foxo1fl/fl、SHP-1fl/fl小鼠交配,得到NKp46-iCre;Foxo1fl/flSHP-1fl/fl(Foxo1△NKSHP-1△NK)小鼠,即在NK细胞内同时敲除Foxo1和SHP-1的小鼠,观察小鼠的生长发育和成瘤情况。2.利用流式细胞术,检测NK细胞内Foxo1和SHP-1双基因缺失后小鼠主要淋巴器官中NK细胞的比例变化。［结果］1.成功建立了NK细胞内特异性Foxo1和SHP-1双基因缺失小鼠模型,连续观察小鼠42周,与对照组小鼠(Foxo1fl/flSHP-1fl/fl)相比,小鼠生长发育未见明显异常,未形成自发性肿瘤。2.与对照组相比,Foxo1ΔNKSHP-1ΔNK小鼠外周血和淋巴结中NK细胞比例明显降低（BL:6.26%±0.478%vs 4.39%±0.23%）（P﹤0.01,n=3）;（LN:0.431%±0.08%vs 0.17%±0.04%）（P﹤0.05,n=3）;骨髓中NK细胞比例升高（BM:1%±0.09%vs 2.81%±0.76%）（P﹤0.05,n=3）;脾脏和肝脏中淋巴细胞所占比例无统计学差异（SP:1.59%±0.07%vs 2.27%±0.76%）（P﹥0.05,n=3）;（8.11%±2.99%vs 8.17%±0.73%）（P﹥0.05,n=3）。［小结］抑癌基因Foxo1和SHP-1在小鼠NK细胞淋巴瘤发生过程中可能不具备关键作用,同时缺失后影响小鼠体内主要器官NK细胞的分布。第三部分:抑癌基因Foxo1和PTEN、染色体13q14在小鼠NK细胞淋巴瘤发生中的作用探索［方法］1.利用NKp46-iCre;Foxo1fl/fl13q14fl/fl小鼠与PTEN小鼠交配,最终得到NKp46-iCre;Foxo1fl/fl13q14fl/flPTENfl/fl(Foxo1△NK13q14△NKPTEN△NK)小鼠,即NK细胞内特异性敲除Foxo1、13q14和PTEN小鼠,观察小鼠的生长发育和成瘤情况。2.利用流式细胞术,检测NK细胞内Foxo1、13q14和PTEN同时缺失后,小鼠主要淋巴器官内的NK细胞的比例变化。［结果］1.成功建立了在NK细胞内Foxo1、13q14、PTEN缺失小鼠模型,连续观察小鼠42周,与对照组(Foxo1fl/fl13q14fl/flPTENfl/fl)相比,Foxo1△NK13q14△NKPTEN△NK小鼠生长发育未见明显异常,未形成自发性肿瘤。2.与对照组相比,Foxo1△NK13q14△NKPTEN△NK小鼠的外周血、骨髓、淋巴结、脾脏中NK细胞所占比例无明显变化。（BL:5.23%±0.87%vs 6.98%±2.04%）（P﹥0.05,n=5）;（BM:1.21%±0.24%vs 1.49%±0.19%）（P﹥0.05,n=5）;（LN:0.51%±0.11%vs 0.66%±0.04%）（P﹥0.05,n=5）;（SP:2.51%±0.61%vs 2.76%±0.48%）（P﹥0.05,n=5）［小结］抑癌基因Foxo1、PTEN和染色体13q14在小鼠NK细胞淋巴瘤发生过程中可能不具备关键作用。［结论］Foxo1、PTEN同时缺失后对小鼠体内NK细胞介导的肿瘤免疫监视功能影响不大。抑癌基因Foxo1、PTEN、SHP-1和染色体13q14在小鼠NK细胞淋巴瘤发生过程中可能不具备关键作用。