绿黄隆残留免疫分析化学研究

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绿黄隆是超高效磺酰脲类除草剂,农田土壤中绿黄隆残留量>0.5ng/g就可能对敏感作物造成药害。 本文在已获绿黄隆抗体基础上,首次制备了对绿黄隆具特异性的高容量免疫亲和色谱柱(IAC),考察了免疫吸附剂的性能,对IAC条件进行了优化,选择pH7.2磷酸缓冲液作为吸附与平衡介质,80%甲醇作为最佳洗脱液。在优化条件下,IAC柱的动态柱容量最高可达3.5 μ g绿黄隆/ml gel。当样本溶液中绿黄隆含量<2ng/ml时,经IAC柱吸附分离后,富集效率>250倍。经IAC柱净化后的空白土壤提取液(二氯甲烷提取路线)作绿黄隆标样的稀释介质,用包被抗体(酶标半抗原,E-H)直接竞争ELISA法检测,所得工作曲线与标准曲线(用pH7.2 PB作绿黄隆标样的稀释介质)基本一致。其IC50为10.14ng/ml,IC20为0.4143ng/ml。在空白土壤样本中添加0.1 μ g/g绿黄隆,提取液经IAC柱净化浓缩后,用E-H直接竞争ELISA法检测,三次重复的平均回收率为94.09%,变异系数为10.11%。 建立了包被抗体(酶标半抗原,E-H)直接竞争ELISA法。在优化条件下(最佳抗原抗体稀释倍数、pH、离子强度、竞争反应时间等),以未经IAC柱的空白土壤提取液(碳酸盐缓冲液提取路线)作绿黄隆标样的稀释介质,E-H直接竞争ELISA法检测,所得工作曲线与标准曲线有一定差异。其IC50为0.1095 μg/ml,IC20为1.53×10-3μg/ml。在使用绿黄隆进行麦田除草的不同地区、不同使用年限的农田中分别取土样,分离提取(碳酸盐缓冲液提取路线)土壤中的绿黄隆残留,E-H直接竞争ELISA法检测。结果表明:绿黄隆连续使用5年、3年和使用1年的田块其绿黄隆平均残留量分别为0.35 ng/g、0.295 ng/g、0.234 ng/g,随使用年份的增加略有累积。平行条件下,在空白土壤中添加0.1 μ g/g绿黄隆,E-H直接竞争ELISA法测得平均回收率为84.69%。土壤中绿黄隆残留ELISA法的检测结果采用生物测定方法加以验证,两者测定结果基本一致。 偏振荧光免疫分析法(PFIA)是基于荧光素标记的半抗原与相应抗体结合后免疫复合物偏振荧光的变化为基础的均相竞争免疫分析方法。本文首先建立了示踪剂(荧光标记半抗原)和抗体的稀释曲线,选择示踪剂的最佳工作浓度为6×10-8mol/L,抗体的最佳工作浓度为2×10-7mol/L。在此基础上,将不同浓度的绿黄隆标样溶液、抗体溶液与示踪剂溶液三者混合反应,测定偏振荧光的变化。建立扬州大学硕士学位论文绿黄隆偏振荧光免疫分析标准曲线,并进行回归分析。所得回归方程为x二70.57+zg.4oLoge,Ies。二0.08397。岁mL,IeZ。=2.39xzo一3og/mL。
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