丙型肝炎病毒(HCV)慢性感染是引发终末期肝病的主要病因之一,严重影响着人们的健康。目前尚无有效的HCV防治疫苗,临床上主要采用抗病毒治疗策略。但由于HCV感染具有极强的组织特异性,目前HCV的体外培养主要在肝癌细胞系Huh7.5中完成,因此获得安全来源的HCV病毒颗粒是HCV疫苗的研发过程中一个亟待解决的问题。KMB17是一株安全性经过验证的人二倍体细胞株,已用于多种疫苗的生产,研究以KMB17为研究对象,希望构建一株能用于HCV生产的细胞基质。为研究HCV对KMB17细胞中的感染特性,我们制备出高灵敏度的HCV假病毒颗粒(HCVpp),并使用HCVpp感染KMB17细胞,发现在自然情况下KMB17不能有效支持HCV的感染。进一步研究表明,HCV感染与CD81受体,B族1型清道夫受体(human scavenger receptor class B type 1,SR-BI),封闭蛋白claudin-1(CLDN1),人紧密连接蛋白occludin(OCLN)等受体的表达密切相关。为找到HCV感染KMB17细胞过程中所缺的细胞因子,我们分别从转录水平及翻译水平对KMB17细胞中HCV感染相关的四个受体的表达量进行分析。通过慢病毒包装的方式将这四种受体基因包装成慢病毒,分别或两两共表达将受体基因导入KMB17细胞中后,使用HCVpp感染KMB17,检测荧光素酶报告基因的活性,或者使用HCVcc感染KMB17,检测细胞内core蛋白的表达情况,通过分析在KMB17中过表达相应受体后HCV感染情况的变化,确定在KMB17细胞所缺乏的支持HCV感染的受体种类。结果显示,KMB17细胞同时过表达OCLN与CLDNI两种受体后,HCV的感染能力明显增强,表明OCLN与CLDNI的同时表达是支持KMB17细胞成功感染HCV的必要条件。为了研究HCV在KMB17细胞中的复制效率,我们首先使用带有荧光素酶报告基因及杀稻瘟菌素(blasticidin)抗性基因的HCV复制子检测HCV在KMB17细胞中的复制情况,发现KMB17并不支持HCV的复制。为了使KMB17细胞支持HCV的复制,我们通过假病毒感染的方法在KMB17细胞中导入HCV复制增强因子miR122后,再检测HCV复制子在KMB17细胞中的复制情况,发现KMB17能少量支持HCV的复制。但由于KMB17细胞的传代次数有限,不能进行复制子细胞克隆形成实验的长期筛选,我们尝试将KMB17细胞进行永生化处理,成功获得KMB17永生化细胞系KMB17TT,在KMB17TT细胞中导入miR122后,发现细胞能少量支持HCV的复制,但经抗性筛选后未能获得复制子细胞克隆。提示了在KMB17细胞中可能存在其它因子限制HCV的复制,KMB17细胞中影响HCV复制的限制因子仍然有待进一步深入的研究。假病毒在多种病毒的感染性研究中应用广泛,检测过程简单快捷。研究将HCVpp包装所用的假病毒包装体系用于新型冠状病毒(SARS-CoV2)的感染性研究中,结果显示SARS-CoV2对生产常用的Vero细胞适应性更强,同时也观察到SARS-CoV2对人的肝脏,肾脏,肠道细胞更易感,在不同物种中对树鼩和人的肝细胞感染性更强,猴子的感染性相对较弱,该结果与临床数据相吻合,且操作的安全性更高,使得SARS-CoV2的体外感染性研究可以在普通实验室中进行。