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无浆体病(Anaplasmosis),亦称为边虫病,是由无浆体(Anaplasma)寄生于人和动物宿主血细胞内引起的蜱源性疾病。该病在全世界范围内广泛分布,且宿主范围也十分广泛,以嗜吞噬细胞无浆体(A.phagocytophilum)为例,该病原可感染野生哺乳类动物、禽类、反刍动物、啮齿类动物、爬行动物、驯养动物以及人类,对整个养殖业以及人类健康产生了巨大的威胁,属于具有重要公共卫生学意义的人兽共患病。然而,目前我国对无浆体宿主范围的研究十分有限,主要研究对象集中于啮齿类动物和一些反刍类动物。因此本研究对我国部分地区几种不同动物血液中无浆体的感染情况进行了调查,为我国对于该病的防控提供一定的科学依据与参考。1.为了解我国部分地区不同宿主动物无浆体的感染情况,本研究于2014年3月至2016年1月使用巢式PCR法,对采自河南省(洛阳市宜阳县、洛阳市新安县、汝州市、长葛市、鹤壁市)、贵州省(麦坪县、龙里县、盘县)、云南省(保山市龙陵县)共9个市、县区的285份羊血液样品;采自河南省郑州市、洛阳市宜阳县、新安县以及贵州省麦坪县的240份犬血液样品;采自河南省鹤壁市的44份牛的血液样品;采自郑州市动物园的103份野生禽类血样以及16份野生哺乳动物血样进行三种无浆体的检测。结果在不同种动物体内均发现了三种无浆体的阳性样品,不同地区的无浆体感染情况亦不相同,贵州和云南总感染率分别达76.53%和91.67%,高于河南地区总感染率13.23%,可能与地理环境的差异有很大关系。不同种动物的感染率不同,所调查的285份山羊和绵羊样品无浆体总感染率高达54.74%(156/285),A.phagocytophilum感染率为23.86%(68/285),A.bovis感染率达43.86%(125/285),而A.ovis感染率为23.86%(68/285);首次在我国发现犬感染三种不同无浆体,A.phagocytophilum,A.bovis,A.ovis三种无浆体的感染率分别为0.42%(1/240),2.08%(5/240),5.00%(12/240);并首次于我国动物园饲喂的长颈鹿、马鹿、狐狸等野生动物体内检测到这三种无浆体。羊的三种无浆体感染率均要高于犬等其他品种的动物,可能与不同变异株的宿主特异性有一定的关系。山羊的Anaplasmas总感染率高达76.19%(122/147),明显高于绵羊的感染率24.64%(34/138);采用放牧方式下的羊Anaplasmas的感染率高达84.15%(138/164),显著高于舍饲羊只的感染率14.88%(18/121);羊场所养犬只及流浪犬只的无浆体感染率要高于普通家庭所养宠物犬;无浆体混合感染情况较为普遍,混合感染率高达30.18%(86/285)。2.为了解不同宿主动物间三种无浆体分离株的差异性,基于A.phagocytophilum,A.bovis的16S r RNA基因以及A.ovis的MSP4基因位点对样品进行扩增,从源于不同地域不同动物的Anaplasmas阳性样品随机抽取103份进行测序。应用Clustal X 2.11软件和Vector NTI Advance 11.5.1软件分别对得到的上下游序列进行碱基比对及序列拼接。用DNAStar 8.0中的Meg Align软件将所得序列与国内外参考序列进行同源性分析。最后使用Mega6.06软件进行三种无浆体病原的种系发育分析并采用Maximum Likelihood法进行核苷酸序列分析并绘制遗传进化树。本研究对不同种宿主动物A.phagocytophilum的16S r RNA进行检测,共于三种动物(羊、犬、长颈鹿)中发现4种基因型(A、B、C、D),其中出现3种新基因型国内外未曾报道过。首次在我国发现长颈鹿的AP新基因型D,其与基因型A、B、C间的碱基差异较大,同源性在98.1%-98.2%之间,与所报道的羊源参照株JN558813之间存在11个碱基差异。另在羊和犬的样本中均发现了新的基因型,但其与参照株JN558813仅存在1个碱基的差异,同源性高达99.8%,AP羊源分离株是否能够感染犬还需要进一步开展动物实验验证。首次在不同种类动物体内发现了A.bovis 16S r RNA,且共发现5种序列类型,其中除基因型A与参照株KP314251完全相同外,其余4种序列(B、C、D、E)为未曾报道过的新基因型。长颈鹿源A.bovis新基因型E的发现亦是首次报道,与基因型A、B、C、D间的同源性最低,与参考株间存在11个碱基的差异。此次在羊中发现2种基因类型A、B,在犬中共发现了A、C、D 3种不同序列类型。从不同种动物中共发现10种不同的A.ovis MSP4基因类型,其中仅有基因型A与参照株KJ782397完全相同,其余9个基因型均与国内外所报道的序列间存在个别差异,但序列间的同源性较高。首次在犬中发现B、D、E、F、G、H 6种不同A.ovis MSP4新序列类型,其中基因型B、G与人源分离株序列FJ460443间的同源性均高达99.8%,说明犬源A.ovis MSP4基因变异株存在侵染人类的可能性。在羊血液样本中共发现A、B、C、E型4种不同序列类型,并首次在我国动物园所饲狐狸和马鹿中发现了新基因型I、J。本研究充分说明了不同宿主动物三种无浆体基因序列间存在遗传多样性。此次共于不同动物中发现4种A.phagocytophilum 16S r RNA基因型,5种A.bovis 16S r RNA基因型以及10种A.ovis MSP4基因型,且多数为国内外未曾报道的新基因型。本研究也为人兽共患病的相关性研究以及我国养殖业的健康发展提供了一定的科学依据,具有较为重要的公共卫生安全意义。