前言 颅缝早闭，也称颅狭小畸形，发病率1／2500，是一种病因尚不清楚的常见疾病。颅缝早闭的临床诊断包括许多以颅骨与脑的生长不相适应为其特征的疾病，如颅面部畸形，颅内高压、失明等等。这些疾病的表现可以分为三个方面： 一、孤立的表现； 二、合并有代谢的异常； 三、做为家族性颅缝早闭综合症的一部分。 SD鼠颅缝提供了一个研究正常颅缝融合的模型。本实验应用较大样本鼠颅缝研究人类颅缝闭合前、闭合时及闭合后bFGF的表达差异，为探讨颅缝早闭病因提供进一步理论依据。 材料与方法 本研究共用SD鼠60只。分别是生后1、6、12、17、22、35天，按其出生天数分为6组，每组10只。取下整个颅骨，未做任何外科或生物化学处理，每个时间段10个动物且均年龄相同，剪下额后缝及矢状缝。制备4μm石蜡切片，进行bFGF免疫组化染色及HE染色。观察SD鼠生后PF缝、SAG缝的形态学变化。 结果 1．HE染色结果 从组织学上看，额后缝闭合开始自12天，于22天完成，在这些时间段矢状缝(SAG)均开放。 2．BFGF免疫组化染色结果 出生后第1天，颅缝结缔组织和两种颅缝边缘的少数成骨细胞中，可见少量bFGF染色。出生后第6天，成骨细胞和附近的骨膜细胞免疫反应明显增加，颅缝结缔组织染色也明显增加。第12天时，额后缝结缔组织染色明显增加，颅缝下面的硬脑膜中有大量的bFGF染色高度阳性的成骨细胞，其下硬脑膜可见bFGF高度深染。第17天时，该颅缝颅骨内面闭合，可见颅缝成纤维细胞和其下硬脑膜深染。第22天时，整个颅缝几乎都已闭合，仅残余少量颅缝结缔组织。第35天时，颅缝完全闭合，颅缝中成熟的骨细胞对bFGF仅有轻度反应。矢状缝检查bFGF染色类型和强度有显著不同。在所有检查时间点，bFGF都轻度染色。 3．FGF－RZ免疫组化染色结果 FGF－RZ染色在生后第二天，颅骨前缘的成骨细胞和颅缝的成纤维细胞中，可见轻度染色，其下硬脑膜染色中度。在6上、17在2天时额后缝表面排列的成骨细胞，特别是颅骨内板表面的成骨细胞对FGF－RZ免疫反应中度，颅缝结缔组织染色很轻甚至无染色。第6天动物的矢状缝可见成骨细胞和结缔组织FGF－RZ中度染色。第12天颅缝结缔组织对FGF－RZ的反应强烈，第17天和第22天，可见FGF－RZ在颅缝结缔组织中度染色，第35天，矢状缝中FGF－RZ染色轻微。 讨 论 1．颅缝的生理发育 颅缝在脑组织生长过程中既能维持颅骨的连续性，又能为相邻骨生长柳空间，在发育过程中，骨缝逐渐形成锯齿状结构，开放骨缝最终关闭，形成骨桥。人类颅缝中额缝在2岁时融合，俄颅缝均在20刁0岁左右融合。 MOSS在1960年首先建立了研究颅缝问题的动物模型，他发现SD鼠PF缝于12－22天发生闭和，而其他颅缝保持未闭，这类似于人类额缝与其他颅缝的关系，所以，本实验沿用了SD鼠作为 ·2· 研究颅缝的模型。 2．bFGF的生理作用 对生长因子的研究是当今生物科学中的前沿课题之一，bFGF 是一种多肽调节因子，它能刺激软骨细胞增殖和胞外基质的完成。 3．b观和 FGF－RZ与颅缝发育 在本实验中，PF缝中的bFGF量的表达随着PF缝的融合与 矢状缝中bFGF量的表达有明显的不同。颅缝活跃融合时，免疫 染色强；颅缝融合结束或未融合，兔疫染色较弱。这说明了bFGF 免疫表达强弱与颅缝融合步骤相一致。可以推测动FGF在SD鼠 PF缝生长，发育，融合中有重要的作用。 FGF－RZ的表达显示了与 bFGF完全不同的免疫表达类型， 提示了在局部颅缝发育过程中，FGF—RZ具有负性调节功能。免 疫表达强时，SAG缝保持未闭；免疫表达弱时，PF缝闭和，也就是 说相对bFGF来说，FGF－RZ对局部生长发育调控中起决定作用， 同时提示了FGF—RZ对颅缝融合起负调节作用。 4．bFGF与颅缝早闭畸形 FGF－RI基因的突变与 Pfeiffer综合症有关； FGFGF－RZ基因 的突变与Cro。on，J。kson－Weiss，APert，地er的一种重型有 关；FGF－R3基因突变与 Adelaid型颅缝早闭和软骨发育不全有 关。 结 论 1．SD鼠PF缝在生后 12－22天融合，其融合方向为从颅内向 颅外。 2．BFGF及FGF－RZ对颅缝融合起促进作用，二者表达的强 度与时间位点不一致，可能与PFJAG缝融合方式不同有关。