【摘 要】
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近年来的研究表明,miRNA通常在转录后水平来调控基因的表达,其在肿瘤组织中的异常表达与肿瘤的发生发展有至关重要的作用。在胶质瘤的研究中,miRNA与SALL4的调控关系的研究较
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近年来的研究表明,miRNA通常在转录后水平来调控基因的表达,其在肿瘤组织中的异常表达与肿瘤的发生发展有至关重要的作用。在胶质瘤的研究中,miRNA与SALL4的调控关系的研究较少,具有相同“种子区”的多个目标miRNA共同调控SALL4也未见报道。为了探究miR-103、miR-195和mi R-15b的作用,我们采用MTT增殖实验发现miR-103、miR-195和miR-15b可以显著抑制脑胶质瘤细胞的增殖能力。为了探讨其抑制增殖的机制,我们采用PI/AnnexinV双染色流式细胞仪分析细胞凋亡,发现miR-103、miR-195和miR-15b可以诱导脑胶质瘤细胞的凋亡,且这3种miRNA存在竞争关系。同时,我们也采用Transwell细胞小室实验检测这3种miRNA对胶质瘤细胞迁移及侵袭能力的影响。结果显示,miR-103、miR-195和miR-15b可以在不同程度上抑制细胞的迁移和侵袭,并且共同转染这3种miRNA的结果表明miR-103、miR-195和miR-15b存在竞争关系。我们用实时定量RT-PCR技术对mi R-103、miR-195和miR-15b在脑胶质瘤组织样品中的表达情况进行了分析,结果表明60%以上的肿瘤组织样品中,这3种miRNA的表达水平显著降低,结合课题组前期SALL4在同种胶质瘤中的表达水平的检测结果,并通过SPSS软件进行相关性分析,表明miR-103、miR-195和mi R-15b与SALL4具有显著的负相关性。经生物信息分析发现miR-103、miR-195和miR-15b都有以SALL4作为直接靶基因的可能性,并且具有相同的种子序列。应用荧光素酶双报告系统、实时定量PCR、Western Blot等进行鉴定,结果表明miR-103、miR-195、miR-15b竞争性抑制SALL4蛋白水平的表达,以此得到SALL4是miR-103、miR-195、miR-15b的直接靶基因的有效证据。综上所述,本论文研究结果表明,miR-103、miR-195和mi R-15b竞争性抑制SALL4的表达,从而抑制脑胶质瘤细胞的增殖,迁移和侵袭能力。
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