N-酰基高丝氨酸内酯（N-acyl-homoserine lactones,AHLs）参与介导革兰氏阴性菌间的通讯,是细菌群体感应（Quorum Sensing,QS）中常见的信号分子之一。有证据表明AHLs除了能被细菌感知,还参与调控植物细胞生长活动。本实验室前期已经证实GCR2参与细菌信号3OC6-HSL的传递过程,且能够特异性结合3OC6-HSL。那么GCR2蛋白在感知信号3OC6-HSL后通过什么方式传递信号的分子机制,目前尚不清楚。最近证实,在哺乳动物中与植物GCR2蛋白氨基酸序列高度同源的Lan CL2是激素ABA的受体蛋白,其豆蔻酰化修饰使得Lan CL2蛋白定位于质膜发生并核转质从而介导ABA信号的传递过程。我们发现在植物GCR2蛋白的氨基酸序列中含有潜在的豆蔻酰化位点,于是猜测GCR2蛋白在感知传递信号3OC6-HSL的过程中,其豆蔻酰化修饰可能发挥着重要作用。因此,探究GCR2蛋白豆蔻酰化修饰作用,解释GCR2感知传递细菌信号3OC6-HSL的分子机制是本文的研究重点。本文从表型上分析,信号分子3OC6-HSL和豆蔻酰化抑制剂2-羟基十四烷酸（2-Hydroxy Myristic Acid,HMA）处理野生型Col-0拟南芥幼苗植株,结果显示3OC6-HSL和HMA互作后会抑制拟南芥的主根生长,表明豆蔻酰化作用参与信号感知传递过程。从分子生物学入手,通过构建重组表达载体Flexi-GCR2和Flexi-G2A豆蔻酰化位点突变的GCR2,利用TNT麦胚无细胞转录翻译系统分别掺杂加入³⁵S-甲硫氨酸和[9,10-³H]-豆蔻酸合成GCR2和G2A蛋白。通过放射自显影分析发现合成GCR2和G2A蛋白,但未检测到豆蔻酰化修饰作用;利用豆蔻酸衍生物Alk14和3OC6-HSL处理GCR2过表达植株采用点击化学法检测进行豆蔻酰化状态,结果也未检测到蛋白的豆蔻酰化修饰作用。从遗传学角度分析,通过构建重组表达载体p BI121-GCR2-GFP和p BI121-G2A-GFP,获得农杆菌GV3101转化菌株。采用农杆菌介导浸花法侵染GCR2缺失型拟南芥突变植株gcr2-2,通过抗性筛选等手段,获得T0代转基因植株17株。为补充说明前期N-癸酰高丝氨酸环内酯（N-decanoyl-HSL,C10-HSL）对拟南芥细胞内钙离子变化的影响,利用Fluo-4,AM荧光探针法和钙离子的不同抑制剂异搏定（VP）、EGTA、LiCl和La Cl₃来探究钙离子的具体来源,结果显示,C10-HSL处理引起细胞内钙离子变化,且能够抑制拟南芥主根生长,加入抑制剂后主根抑制作用有所回复,LiCl回复作用明显,说明胞内钙离子释放参与C10-HSL信号的传递。