论文部分内容阅读
大量研究表明,LncRNA MALAT1和NEAT1作为致癌基因在包括乳腺癌在内的多种癌症中异常表达并促进肿瘤发生发展。SMYD3是一种组蛋白甲基化酶,可以特异性使H3K4、H4K5、H4K20发生组蛋白甲基化,并可作为转录因子调控基因转录表达、参与信号转导过程,其过表达在乳腺癌中具有关键的作用。然而,MALAT1/NEAT1与SMYD3在乳腺癌中的调控关系在国内外均未见报道。因此,本文对此展开了以下研究。首先,在乳腺癌细胞MCF-7中采用RNAi技术特异性干扰内源性MALAT1、NEAT1基因表达,细胞划痕和MTT实验结果表明MALAT1、NEAT1被敲低后可明显减缓肿瘤细胞的迁移,并抑制乳腺癌细胞的增殖,同时Real-Time PCR和Western blot检测显示SMYD3及其下游靶基因N-cahderin,MMP9,MYL9和CYR61的转录表达均会受到抑制,表明MALAT1、NEAT1会诱导SMYD3转录表达并影响其信号通路。此外,用 0,2.5,5,10 ng/mL 的 TGF-β1 处理 MCF-7 细胞后,Real-Time PCR 结果表明NEAT1、MALAT1和SMYD3的表达均随着TGF-β1的添加含量而上升,进一步利用2.5 ng/mL的TGF-β1和si-NEAT1联合处理细胞后,Western blot分析结果表明NEAT1的敲低可以抑制TGF-β1对SMYD3表达的诱导作用,表明MALAT1、NEAT1参与了 TGF-β 1对SMYD3的调控过程。接下来,经生物信息学分析发现MALAT1、NEAT1和SMYD3的3’UTR都存在miR-506/124的结合位点。在乳腺癌细胞中转染miR-506/124 mimics后,MALAT1、NEAT1及SMYD3均呈现明显下调,反之,转染miR-506/124 inhibitors则可使MALAT1、NEAT1及SMYD3发生上调。此外,RNAi技术敲低MALAT1/NEAT1后亦可使miR-506/124 含量增加。进而采用 MALAT1/NEAT1 的 siRNA 和 miR-506/124 inhibitors联合转染处理细胞后,结果显示:MALAT1/NEAT1的干扰会减弱miR-506/124 inhibitors对SMYD3转录和翻译水平的促进作用。这些结果表明MALAT1/NEAT1在乳腺癌中可作为miR-506/124的竞争性内源RNA(ceRNA)调节SMYD3的表达。最后,Real-time PCR及荧光素酶报告分析还发现SMYD3对MALAT1也存在一定的转录激活作用,表明彼此间存在着正反馈环状转录调节机制。总之,LncRNA MALAT1/NEAT1 可以作为 miR-506/124 的 ceRNA 调控 SMYD3,同时SMYD3可反馈性激活MALAT1的转录,这一相互调控作用将影响到乳腺癌细胞的增殖与迁移能力,为乳腺癌的防治提供了一些新的思路。