Trim32在血管内皮损伤后内膜增生中的作用及机制研究

来源 :西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sm2998
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:探讨Trim32(tripartite motif32,E3泛素连接酶32)在血管内皮损伤后内膜增生中的作用及相关分子机制。
  方法:本研究分为动物实验及细胞实验两个部分,动物实验:为检测Tri m32在血管内皮损伤后增生内膜中的变化,将雄性C57BL/6J小鼠分为假手术组和内皮损伤组,内皮损伤组通过用粗糙金属导丝摩擦损伤小鼠左颈总动脉以建立血管内皮损伤后内膜增生模型,以不用导丝摩擦损伤小鼠左颈动脉,其余手术过程同内皮损伤组一致的小鼠作为假手组。术后常规普通饲料喂养,28天后血管取材,通过实时定量PCR、Western Blotting检测各组小鼠颈总动脉中Trim32的表达情况。为进一步验证Trim32的作用,将小鼠分为假手术+空病毒组、假手术+shTrim32组、内皮损伤+空病毒组、内皮损伤+shTrim32组,shTrim32组采用携带shTrim32的腺病毒注射到左颈总动脉的损伤部位,小鼠随后在手术后7、14、21天通过尾静脉追加shTrim32腺病毒敲低Trim32。空病毒组采用携带阴性对照腺病毒注射到左颈总动脉的损伤部位,小鼠随后在手术后7、14、21天通过尾静脉追加阴性对照腺病毒作为对照;术后28天通过HE染色检测血管内膜增生情况,Ki-67免疫组化染色检测细胞增殖情况。为进一步明确β-catenin是否为Trim32的下游靶点,将小鼠分为内皮损伤+空病毒组、内皮损伤+shTrim32组、内皮损伤+shTr im32+SKL2001组,内皮损伤+空病毒+SKL2001组,SKL2001(β-catenin蛋白激动剂)组通过尾静脉注入SKL2001,术后28天通过HE染色实验观察内膜增生情况。细胞实验:将小鼠血管平滑肌细胞分为溶剂对照组(DMSO组)、重组人血小板衍生生长因子(Platelet-Derived Growth Factor-BB,PDGF-B B)组,细胞完全培养基培养24小时,然后提取细胞中的RNA及蛋白质分别采用实时定量PCR、Western Blotting实验检测各组细胞中Trim32的mRNA及蛋白的表达情况;为进一步验证Trim32在血管平滑肌细胞增殖及迁移中的作用,将小鼠平滑肌细胞分为空载体+对照(DMSO)组,siTrim32+对照(DMSO)组、空载体+PDGF-BB组、siTrim32+PDGF-BB组;血管平滑肌细胞siTrim32应用小干扰RNA(siRNA)以沉默平滑肌细胞中Trim32的表达,培养24小时后提取各组细胞中的蛋白质通过Western Blotting检测各组血管平滑肌细胞Trim32及β-catenin的蛋白表达情况;用CCK-8、Ki-67免疫荧光、划痕试验检测各组细胞增殖、迁移的情况。为进一步明确在血管平滑肌细胞增殖迁移过程中,β-catenin是否为Trim32的下游靶点,将细胞分为PDGF-BB+空载体组、PDGF-BB+siTrim32组、PDGF-BB+siTrim32+SK L2001组,各组细胞于相同条件下培养24小时后通过Ki-67免疫荧光及划痕试验检测细胞的增殖与迁移能力。
  结果:小鼠内皮损伤后内膜增生模型中Trim32的mRNA及蛋白表达量增加;内皮损伤组中血管内膜增生明显,敲低Trim32表达后,内膜增生明显改善。激动β-catenin后,发现改善后的内膜增生又被逆转。与对照组相比,小鼠血管平滑肌细胞在PDGF-BB干预后,Trim32的mRNA及蛋白表达量增加。敲低Trim32后,β-catenin表达呈下降的趋势,细胞增殖及迁移也呈下降的趋势;应用SKL2001激动β-catenin后,血管平滑肌细胞增殖与迁移下降趋势被逆转。
  结论:Trim32可能通过β-catenin途径促进血管平滑肌细胞增殖及迁移,从而在血管内皮损伤后内膜增生的过程中发挥作用。
其他文献
学位
目的:大脑在看似静息的状态下,内部神经元的活动瞬息万变。动态功能连接考虑了更短时间范围内的功能连接波动,较静态功能连接而言更能反映大脑内在信息交互的动态变化。本研究基于静息态功能磁共振(rs-fMRI)数据,采用动静态局部一致性(ReHo)、ROI脑网络连接差异和大尺度网络连接分析法,探讨脑小血管病(CSVD)患者动态功能连接和静态功能连接的差异及CSVD患者不同程度认知功能障碍的脑功能改变。  
目的:创伤性胰腺炎常因胰腺外伤引起发病,临床症状表现为类似急性期的胰腺炎反应,但其发病机制不同于普通急性胰腺炎,常规的急性胰腺炎国内多因胆道梗阻疾病引发胰管堵塞发病、国外多因过量饮酒致病,但创伤性胰腺炎常合并胰腺自身外伤,胰腺损伤的同时常伴发其周围组织器官的损伤,其病情更加复杂。创伤性胰腺炎患者若早期处理不及时将易导致中后期全身性的炎症反应、多器官功能衰竭等复杂且严重并发症发生。因此控制早期病情的
自身免疫性脑炎(Autoimmune encephalitis AE)是非感染性脑炎中最常见的类型,可能由自身免疫功能异常、肿瘤或其他隐源性原因所引起。AE病程特点通常表现为急性或亚急性起病,临床表现包括认知功能下降、急性精神行为异常、自主神经功能障碍、运动障碍、癫痫发作等多种神经系统缺损症状。AE通过抗体对神经元自身抗原产生抗原抗体反应,其中细胞表面抗原抗体(Antibodies against
目的:研究测定急性大动脉闭塞性脑梗死患者血管内介入治疗责任血管再通前后血清血红素加氧酶1(HO-1)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,分析血清HO-1、SOD表达水平变化特点及其与急性大动脉闭塞性脑梗死梗死严重程度、血管内介入治疗责任血管再通水平、血管内介入治疗术后脑组织出血转化之间的相关性,以期为急性大动脉闭塞性脑梗死血管内治疗探寻临床相关的生物学标记物。  方法:本研究纳入四川省人民医院神经内科
学位
目的:探索急性一氧化碳中毒(ACMP)患者的磁共振弥散张量成像(DTI)中不同部位各向异性分数(FA)值的变化,了解ACMP患者早期中枢神经系统病变特点。  方法:选取2019年10月-2020年11月期间于四川省人民医院就诊的ACMP患者。记录纳入患者的一般情况(年龄、性别)、现病史(急性期是否伴有意识障碍,若有意识障碍详细记录意识障碍持续时间、一氧化碳中毒来源、中毒方式、疾病初期GCS评分)、
目的:应用静息态功能磁共振(Resting-State functional Magnetic Resonance Imaging,RS-fMRI)研究帕金森病(Parkinsons Disease,PD)疲劳患者的脑功能连接模式改变及其病理生理机制。  方法:连续性纳入2019年5月至2020年2月就诊于西南医科大学附属医院的PD患者38例,应用9项疲劳严重程度量表(Fatigue Severi
学位
目的:脑白质疏松症是常见的脑小血管病变的一种影像学标志。近年来,随着脑成像技术的不断进展,脑白质疏松的检出率更高,其临床亚型也正逐步受到重视。目前越来越多的证据表明,它与认知功能损害以及中风后死亡的高风险等有关。本研究旨在分析筛选出临床上与脑白质疏松症严重程度及发生发展相关的危险因素,探索可能预测脑白质疏松临床生物标志物,以期有利于其早期诊断并及时干预。  方法:连续登记入组2014年7月至202
学位